基于TLR4/NF-κB信号通路探讨葛根芩连汤改善非酒精性脂肪性肝炎作用机制

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is similar to type 2 diabetes，which is a common metabolic disease and belongs to the damp heat syndrome. NASH is related with the disturbance of intracellular TLR4/NF-κB signaling pathway; Gegenqinlian decoction was used to treat NASH, which is consistent with the "different diseases- same syndrome- same treatment " principle. Our previous study found that Gegen Qinlian decoction had the function of preventing and treating type 2 diabetes, could inhibit and regulate the structure of intestinal flora, and could improve hepatic insulin resistance; according to reports in the literature, Gegenqinlian decoction can prevent and treat NASH. We propose hypothesis that the effect of anti- Non-alcoholic steatohepatitis is related with the TLR4/NF-κB signaling pathway, which regulate the structure of intestinal flora. We will observe the effect of Gegen Qinlian decoction in the treatment of non-alcoholic steatohepatitis based on signaling pathway of TLR4/NF-κB, by NASH model in rats by high fat diet, HepG2 hepatocyte NASH model and RAW264.7 macrophages model, and by using denaturing gel gradient electrophoresis and molecular biology technology, and confocal laser scanning microscope, further analysis of the mechanism of signal transduction of Gegen Qinlian decoction in the treatment of NASH, which would provide theoretical and experimental basis for development and clinical application of Gegenqinlian decoction, and provide a new target for prevention and treatment of NASH.

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)与2型糖尿病湿热内蕴证类似，为常见代谢性疾病，与TLR4/NF-κB信号通路障碍有关；葛根芩连汤防治NASH符合“异病-同证-同治”的原则。我们前期研究发现：葛根芩连汤具有改善2型糖尿病胰岛素抵抗作用，可抗炎和调节肠道菌群结构，以及可改善肝细胞胰岛素抵抗；文献也报道，葛根芩连汤可防治非酒精性脂肪性肝炎。本课题提出“葛根芩连汤改善非酒精性脂肪性肝炎作用，可能与其通过调节肠道菌群作用于TLR4/NF-κB信号通路有关”（假说）；拟以高脂饮食建立大鼠NASH模型，及体外HepG2肝细胞NASH模型和RAW264.7巨噬细胞炎症反应模型，观测葛根芩连汤干预TLR4/NF-κB信号通路防治NASH作用，运用变性梯度凝胶电泳和现代分子生物学技术，结合激光共聚焦，分析葛根芩连汤改善NASH可能机制，为其开发和临床应用提供理论及实验依据，为中医药防治NASH提供新靶点。

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)为常见代谢性疾病，与TLR4/NF-κB信号通路障碍有关。葛根芩连汤(GGQLD)是经典名方，可防治NASH。项目组在现有基础上，以高脂饮食建立大鼠NASH模型，采用体外HepG2肝细胞NASH模型和RAW264.7巨噬细胞炎症反应模型，通过血清药理学的方法，采用16S rDNA技术进行肠道菌群分析，以及采用现代分子生物学、组学技术探讨GGQLD改善NASH的作用机制。取得如下成果：（1）GGQLD可改善NASH大鼠脂代谢和肝脏组织病理结构；（2）经蛋白质组学和转录组学分析，其可调节CD40、IRS2等炎症相关基因或蛋白的表达；（3）经粪便代谢产物分析，GGQLD可能参与了类固醇生物合成相关代谢通路的调节；（4）经16S rDNA分析，其可调节肠道肠道菌群结构；（5）GGQLD可改善肝细胞脂肪变性状态，降低TG含量，炎性因子IL-6水平；（6）GGQLD含药血清可降低TLR4 等蛋白和mRNA的表达量，可降低TNF-α、IL-6 mRNA表达水平；（7）GGQLD可在一定程度上抑制NF-κB转位。(8) 此外，初步结果表明，葛根芩连汤还可通过抗氧化应激等改善非酒精性脂肪性肝炎。（9）另外，黄芩-黄连药对为GGQLD的核心药对，项目组也研究了黄芩-黄连药对对NASH等肥胖相关代谢性疾病的影响。同时，本项目以GGQLD为代表性药物，探讨了非酒精性脂肪性肝病（包括NASH）湿热证的发病机制及防治策略。（10）本项目共发表相关论文11篇，其中SCI收录论文4篇，中文核心期刊论文7篇；培养本科生数拾名，已毕业硕士研究生2名。. 综上，研究结果表明，GGQLD改善 NASH 机制与其干预TLR4/NF-κB信号通路相关。本项目采用现代多学科交叉技术和宏微观融合的整体研究方法，探讨了GGQLD改善NASH作用及其机制，为其开发和临床应用提供了理论及实验依据，为中医药防治NASH提供了新靶点；同时，有助于揭示湿热证生物学基础，阐释其科学内涵。