从Wnt信号通路探讨葛根芩连汤促进肠道GLP-1分泌的作用

Many experiments and clinical research confirmed the definite therapeutic effect of Gegen Qinlian Decoction on Type 2 Diabetes Mellitus, but only a few research investigated the mechanism. Our prophase research found that the anti-diabetes effect character of aqueous extract of Gegen Qinlian Decoction was intimate with regulation of GLP-1 correlated pathway, and was definitely effective on increase of GLP-1 secretion of T2DM model rats, even better than metformin. Recent research proved that many monomers of Gegen Qinlian Decoction could accommodate the Wnt signal pathway in different tissues. So we suggest the hypothesis that Gegen Qinlian Decoction could up-regulate the expression of gcg possibly through regulating the Wnt signal pathway of intestinal cells, thus promotes GLP-1 secretion of intestine and induces anti-diabetes effect. And perhaps the therapeutic effect could enhance when used associated with DPP-4 inhibitor. Our research plans to use animals and cells to investigate the regulating effect of traditional Chinese medicine on intestinal GLP-1 secretion through Wnt signal pathway first time, and investigate the effect and character of Gegen Qinlian Decoction on intestinal GLP-1 secretion utilizing methods of immunofluorescence-staining, fluorescent quantitation PCR, RNAi and reporter genes. And our research will also illustrate whether the Wnt signal pathway is the main effect mechanism of Gegen Qinlian Decoction to promote GLP-1 secretion.

多项实验和临床研究证实葛根芩连汤对于2型糖尿病具有明确的治疗作用，但鲜有研究探讨其作用机制。本课题前期研究发现，葛根芩连汤水提物抗糖尿病作用的特点与调控GLP-1相关通路关系密切，具有明确的增加2型糖尿病模型大鼠GLP-1分泌的作用，且优于二甲双胍。新近文献提示葛根芩连汤中多种单体成分对不同组织均具有Wnt信号通路调节作用。由此提出假说：葛根芩连汤可能通过调节肠道细胞的Wnt信号通路引起gcg表达上调，从而促进肠道GLP-1分泌以发挥抗糖尿病作用，且联合DPP-4抑制剂使用疗效可能增强。本课题首次从Wnt信号通路探讨中药对肠道GLP-1分泌的调节作用，拟从整体动物水平和细胞水平，联合应用免疫荧光染色、荧光定量PCR、RNAi、报告基因等方法，探讨葛根芩连汤促进肠道GLP-1分泌的作用效果和特点，并阐释Wnt信号通路是否为葛根芩连汤促进GLP-1分泌的主要作用途径。

葛根芩连汤是经典古方之一，近年来被证实对于2型糖尿病具有明确的治疗作用，但作用机制尚不明确。GLP-1是糖尿病研究的新进展，以此为基础进行研发的药物方兴未艾。新近研究发现，在肠道细胞，经典的Wnt信号通路是调节肠道GLP-1分泌的一条重要信号通路。本课题旨在探讨葛根芩连汤是否通过调节肠道细胞的Wnt信号通路以促进肠道GLP-1分泌，并发挥抗糖尿病作用。.本课题采用自发性2型糖尿病动物db/db小鼠作为整体动物模型。通过观察其体质量、血糖、胰岛素水平等生物学特点，确定该品系小鼠符合药物疗效研究的需要。共设定三个浓度的药物对db/db小鼠进行干预：葛根芩连汤水提物5.85g生药/kg/d（低剂量），11.7g生药/kg/d（中剂量）和23.4g生药/kg/d（高剂量）。结果显示，高剂量葛根芩连汤水提物的作用效果最为明显：高剂量葛根芩连汤水提物可以降低小鼠的进食量和空腹血糖值，并显示出改善小鼠胰岛素耐量的作用。同时，ELISA结果显示高剂量葛根芩连汤水提物可以增加小鼠血中Total GLP-1的水平。.在细胞水平的研究中，本课题分别采用不同浓度的葛根芩连汤水提物干预NCI-H716细胞。结果显示100mg/L和50mg/L的葛根芩连汤水提物可以增加NCI-H716细胞GLP-1的分泌，同时增加NCI-H716细胞中GLP-1的含量。研究结果还显示100mg/L的葛根芩连汤水提物可以增加NCI-H716细胞中Wnt信号通路关键因子β-catenin、TCF7L2和GSK-3β的蛋白表达，并可以上调细胞中pc3基因的表达。.由此认为：1. 葛根芩连汤可以通过促进肠道GLP-1分泌以发挥抗糖尿病作用，作用特点为：减少进食量、降低空腹血糖值以及改善胰岛素耐量等。2. Wnt信号通路是葛根芩连汤发挥促肠道GLP-1分泌的作用途径之一。