发酵技术对葛根芩连汤及其拆方配伍的组分药物及药效作用相关研究

The character of traditional Chinese compound prescription is synergitic and additive action of the drug compatibility. Efficacy on treating diabetes and diarrhea due to internal cold and superficial heat of Gegenqinlian decoction has been recognized by the Chinese medicine. After the fermentation of Gegenqinlian decoction and its dismantlements(Gegenhuangqin formulas, Gegenhuanglian formulas, Gegengancao formulas,), active components were detected by HPLC and LC-MS to define the optimum fermentational method. Analysis and comparing with changer of active components after fermentation , we will obtain the variation. After Fermentation technology applied to Gegenqinlian decoction and its decomposed formulas, While some diabetes and diarrhea models established are used to pharmacodynamic research, it reveal the changers of components and efficacy and confirm the value of biotechnology in the Compatibility and Dismantlement of traditional Chinese Compound Prescription. It will be a new element to develop the science of traditional Chinese formula.

中药复方作用的特点在于药物配伍后产生出相须、相使等合力、增效作用。葛根芩连汤具有治疗消渴和协热下利的作用已被中医药界所认同。课题采用中药发酵技术对葛根芩连汤复方及拆方后新配伍的葛根黄芩方、葛根黄连方、葛根甘草方进行发酵处理，确定最佳优化的发酵条件，通过HPLC及LC-MS技术检测葛根芩连汤及其拆方发酵前后主要物质- - 葛根素、大豆苷、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草苷等，研究发酵条件对这些组分成分变化的影响。并将实验所得的各组分成分进行系统对比分析，寻求葛根芩连汤及其拆方发酵前后组分成分的变化规律。同时进行葛根芩连汤及传统用方的降糖降脂、止泻功效的相关药效学研究，揭示经发酵技术处理后的葛根芩连汤及其拆方和传统葛根芩连汤及其拆方在配伍作用、主要组分变化、药效学作用等变化，以证实生物技术在传统方剂配伍中所体现出新的药物配伍方式和应用价值，为中药方剂学的发展注入新的元素。

葛根芩连汤（GQD）始载于《伤寒论》，由葛根、黄芩、黄连和甘草4味药组成，是中药治疗急性腹泻的经典方剂。现代医家溯本求源，灵活运用，将其作为治疗糖尿病及其并发症的基础方，广泛用于诸多证候。课题采用中药发酵技术对GQD进行发酵研究，通过单因素考察确定GQD最佳发酵菌种为HJ酵母菌，最佳发酵条件为GQD粉碎过60目筛、料液比为12.5g/50mL、发酵时间48h、发酵温度28℃。GQD经HJ酵母菌发酵后，总黄酮含量提高30.20%，总生物碱含量提30.89%，提高有效成分相对含量。通过 UPLC-DAD和LC-MS 技术研究发酵前后GQD样品，共鉴定出53个化合物，包括生物碱类、黄酮类和皂苷类化合物；结果表明酵母菌可以催化黄酮类发生糖基水解反应，生物碱和皂苷类成分未发生糖基水解反应。GQD发酵液降糖降脂作用研究表明，GQD发酵液能够缓解T2DM大鼠体重减轻，调节糖脂代谢异常，增加胰岛素敏感性；保护胰腺及肝脏形态结构，促进胰岛素分泌，改善T2DM大鼠氧化应激状态。GQD发酵液可能是通过影响p38MAPK活性来调节GLUT4表达，促进外周组织对葡萄糖的摄取和利用，改善胰岛素抵抗。基于1H-NMR代谢组学研究表明，GQD饮片、煮散、发酵样品干预后，均能回调糖尿病大鼠血清中代谢物，其作用机制与其调节能量代谢，脂质代谢和氨基酸代谢有关。综上，GQD发酵液降糖降脂药效优于传统GQD，其增效机制可能是由于大分子物质降解，促进药物吸收所致；另一方面酵母菌在发酵过程中会产生葡萄糖耐量因子（GTF），增强其改善IR的作用。本研究拓展了GQD的用药形式，为阐释其治疗糖尿病的作用机制与靶点提供实验依据。系统的探讨了中药发酵技术在研究中药复方配伍、物质基础及作用机理中的作用，为中药发酵技术应用于中药复方开发与研究进行了有益探索。课题研究表明中药发酵技术方法简便易行、专属性强，既可以继承中药复方原有优势，又可以为中药复方研究注入新的元素。