基于特异性敲除技术的葛根素和黄芩苷与葛根芩连汤功效关联机制的研究

Research of the correlation between the traditional Chinese medicine ingredients and the efficacy is the way to determin the effective ingrecients, which is the precondition for the study of the quality control, metabolism, distribution, and pharmacodynamic analysis. Because the pharmacodynamic efficacy of Gegen Qinlian Decoction (GQD) was relatively clear, it was selected for the object in this study. We use puerarin and baicalin monoclonal antibody as a tool to establish the specific immune affinity knockout technology methods.The efficacies of anti-bacteria, fever-reducing and anti-diarrhea of GQD water extract were compared before and after knockout, by this way we can clarify the influence of the content of the puerarin and baicalin on the effects of GQD.With high sensitivity and specificity immunoassay methods which are suitable for the detection of microscale amounts of biological samples,the contribution of puerarin and baicalin to the efficacy of GQD relatationship between content-efficacy-location-pathway were analyzed with the classic model. The standard of evaluation system was a combination of cell and entirety,the static state and the dynamic state, and the efficacy and factors. This study will offering a new approach,technology and methods for the research of Pharmacology efficacy studies of chinese herb medicine.

中药（复方）化学成分与功效之间的关联度是中药物质基础研究的基本科学问题。本研究选择药效相对明确的葛根芩连汤为对象，利用葛根素和黄芩苷单克隆抗体为工具，建立特异性免疫亲和敲除技术方法，制备敲除葛根素、黄芩苷的葛根芩连汤水提物，借助与该药传统功效主治相对应的现代药理作用模型，采用多种动物和细胞，以体内与体外、静态与动态、药效与生物学指标相结合的评价标准，比较特异性敲除葛根素、黄芩苷前后葛根芩连汤水提物药理药效的异同，探讨葛根素、黄芩苷不同含量对葛根芩连汤抑菌、解热、降糖和解痉等方面药效的影响，从而阐明葛根素、黄芩苷与葛根芩连汤功能主治的关联机制。并利用免疫分析技术，解析葛根素和黄芩苷与葛根芩连汤在量-效-点-位方面的关联机制。该研究将为中药有效成分的确定提供新的思路，并为含葛根素和黄芩苷的同类复方的体内代谢、作用靶点寻找等研究提供新的技术与方法。

中药（复方）化学成分与功效之间的关联度是中药物质基础研究的基本科学问题。本研究选择药效相对明确的葛根芩连汤为对象，利用葛根素和黄芩苷单克隆抗体为工具，建立特异性免疫亲和敲除技术方法，制备敲除葛根素、黄芩苷的葛根芩连汤水提物，结果黄芩苷单克隆抗体免疫亲和色谱柱可特异性敲除葛根芩连汤中的黄芩苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素，黄芩中的黄芩苷、高良姜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素，槐米中的槲皮素。葛根素单克隆抗体免疫亲和色谱柱不仅可以敲除葛根芩连汤中的葛根素，而且可以敲除黄芩苷。这是首次完成中药复方的定向敲除研究，证明中药活性成分单克隆抗体免疫亲和色谱柱不仅可以特异性敲除该化合物，而且可以敲除相似结构的化合物，为敲除原理的发展提供了新的线索。.借助与该药传统功效主治相对应的现代药理作用模型，采用多种动物和细胞，以体内与体外、静态与动态、药效与生物学指标相结合的评价标准，比较特异性敲除葛根素、黄芩苷前后葛根芩连汤水提物药理药效的异同，探讨葛根素、黄芩苷不同含量对葛根芩连汤解热、降糖等方面药效的影响，从而阐明葛根素、黄芩苷与葛根芩连汤功能主治的关联机制。并利用免疫分析技术，解析葛根素和黄芩苷与葛根芩连汤在量-效-点-位方面的关联机制。.结果，葛根素和黄芩苷单独从葛根芩连汤中敲除之后，对降低糖尿病并发症药效的影响表现出复杂的多向调节，但是二者同时从葛根芩连汤中敲除后则表现出药效降低的趋势，说明二者存在一定的交互作用，不能简单的说谁是药效物质基础，体现了中医复方的优势。葛根素和黄芩苷在解热作用起效时间方面有一定的促进作用，在解热作用方面没有表现出显著的影响，说明葛根芩连汤的解热作用与葛根素和黄芩苷并没有直接相关性，进一步研究发现对炎症因子的调节是其发挥解热的机理之一。.该研究将为中药有效成分的确定提供新的模板，并为含葛根素和黄芩苷的同类复方的体内代谢、作用靶点寻找等研究提供新的技术与方法。