藏药鲁堆多吉对生殖腺细胞的作用及其分子机制研究

本研究通过现代药物化学技术提取藏药鲁堆多吉中的有效成分，分别利用动物整体实验和性腺生殖细胞（卵巢的颗粒细胞和黄体细胞，睾丸的间质细胞）体外培养的方法研究鲁堆多吉对生殖腺功能的影响，并结合免疫组织化学、RT-PCR、放射免疫、激光共聚焦、ELISA、westernblot等技术探究鲁堆多吉对生殖腺细胞作用时细胞内cAMP、钙离子、蛋白质合成、mRNA、信号转导等变化，阐明鲁堆多吉对生殖腺细胞作用的分子机制，为临床运用藏药鲁堆多吉治疗性功能障碍，不孕不育症，少精症，排卵障碍和月经不调提供实验数据，为藏药的开发和利用提供科学可靠的依据。

本课题以藏药鲁堆多吉(藏党参)——长花党参（Codonopsis thalictrifolia Wall. Var.mollis(Chipp)L.T.Shen）为研究对象，通过应用单因素实验和正交实验两种方法考察了藏党参多糖的提取条件，结果显示，影响党参多糖得率因素的主次顺序为：提取时间>料液比>提取温度>提取次数；多糖最高得率为10.41%；最佳提取条件为提取温度70℃、提取时间4h、料液比1:30、提取次数3次。利用单因素实验确定了藏党参总皂苷的最佳提取方法，结果显示当乙醇浓度达到80%，提取次数为3次时，藏党参总皂苷的得率最大。..用藏党参水提液灌胃雄性SD大鼠，两周后，发现低剂量组（10g/Kg）、中剂量组（20g/Kg）和高剂量组（40g/Kg）能剂量依赖性地降低成龄大鼠的体重增长量、睾丸重量、附睾重量、精囊重量、精子密度、血清睾酮（T）和双氢睾酮（DHT）含量(P<0.05)；同时成龄大鼠血清中卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）浓度呈剂量依赖性升高。..藏党参水提液灌胃雌性大鼠两周后，卵巢重量显著降低(P<0.05)；同时大鼠血清中卵泡刺激素（FSH）含量显著升高 (p<0.05)；血清中谷胱甘肽（GSH）水平显著升高(P<0.05)，丙二醛（MDA）的含量(P<0.05) 显著降低。..与对照组血清的高效液相色谱图对比发现，藏党参含药血清在280nm下约20min时出现一个显著的小尖峰，而藏党参水提液此时没有出现一个显著的小尖峰，提示血清药效物质为藏党参水提液中的代谢成分。..用血清药理学的方法研究发现，与空白对照组相比较，加入藏党参含药血清高于80μl时能显著抑制间质细胞的睾酮分泌，睾丸间质细胞内的cAMP浓度显著降低(p<0.05)。鲁堆多吉含药血清浓度为5%，与颗粒细胞共培养达到24h时，含药血清能够明显降低颗粒细胞的雌二醇含量(P<0.05)，但不影响颗粒细胞的MTT吸光度值（P>0.05）、3β-HSD含量（P>0.05）和孕酮的分泌量（P>0.05）。cAMP通路的抑制剂H89能够逆转含药血清对颗粒细胞雌二醇分泌的抑制作用(P<0.05)。..这说明，藏党参水提液中的成分能够被大鼠吸收，代谢成血清药效物质，从而抑制大鼠生殖系统的生长发育，并且血清中的药效成分可能通过cAMP信号传导途径抑制间质细胞睾酮的合成和颗粒细胞雌二醇的分泌。