超细型和细型细毛羊皮肤组织中基因的差异表达及其遗传效应研究

At present, improving fine-wool sheep quality and yield is the important task of fine-wool sheep breeding. The traits of the fineness of wool, the clear wool yield, wool length are important factors to affect wool quality and yield. Therefore, breeding for these wool traits to improve wool quality and yield are practical significance. This study has completed the superfine-wool sheep skin cDNA library and will clone and identification of a number of new genes; using real-time fluorescence quantitative PCR-SYBR Green I method, 18S, ACTB and GAPDH as reference gene through gene expression differences in the fineness of sheep skin tissue research. Investigate the differential expression of the gene expression pattern in different fineness sheep skin tissue; select differentially expressed genes as candidate genes to study the effect of their genetic regulation, and further provide the basis for the fine-wool sheep wool fiber trait improvement.

目前，提高细毛羊质量与产量是细毛羊育种工作的重要任务，羊毛细度，净毛量，羊毛长度等性状是影响羊毛质量和产量的重要因素。为此，对这些羊毛性状的选育，对提高羊毛质量和产量有着重要的实际意义。本研究拟在已完成超细型细毛羊皮肤组织cDNA文库的构建的基础上,克隆和鉴定一批新基因；采用实时荧光定量PCR技术SYBR Green I法，以18S，ACTB，GAPDH为内参基因通过对不同细度绵羊皮肤组织的基因表达差异进行比较研究,探讨差异表达基因在不同细度绵羊皮肤组织中的表达规律；选择差异表达基因作为侯选基因，在基因组DNA水平上研究其遗传调控效应，为细毛羊毛纤维性状的改良进一步提供依据。

随着人们日益提高的生活水平，对细毛羊选育目标提出了多元化、精细化发展趋势的要求，选育毛用性状不断增加，而通过分子技术阐明主要经济性状的分子机理并挖掘相关功能基因，是进一步提高细毛羊育种效率的必然选择。因此，本课题依托自治区新疆绒毛用羊遗传育种与繁殖重点实验室，开展的如下试验：.（1）采用GLM方法分析固定效应，构建6个不同随机效应组合单性状动物模型筛选每个性状最适分析模型，并通过多性状动物模型平均信息最大似然法估计了细毛羊12个主观鉴定指标和4个现场测定指标性状的遗传力及各性状间的表型相关和遗传相关；（2）基于前期已完成超细型细毛羊皮肤组织cDNA文库的构建的基础上，获得54条EST序列，克隆了1个KRT和3个KAP家族基因全长；（3）采用实时荧光定量 PCR 技术 SYBR Green I 法，同时选用18S，ACTB，GAPDH 作为内参基因，对24个基因在不同细度皮肤组织的表达差异进行比较研究，探讨差异表达基因在不同细度绵羊皮肤组织中的表达规律；（4）利用绵羊600K和50K不同密度SNP芯片技术，不仅构建了2张不同密度的细毛羊拷贝数变异遗传图谱，而且筛选出70个与毛用性状显著相关的SNPs；（5）应用DNA池重测序结合Massarry技术鉴定了5个候选基因中有10个SNPs显著影响细毛羊产毛量与毛品质性状；（6）利用PCR-SSCP等方法对KRT26、TXNIP、TFDP1、FAIM、PIK3CA、ADAM9、FZD3等毛性状相关侯选基因的遗传多样性进行分析,结合所有基因的SNP 信息，综合分析其SNP对毛用性能的调控效应，找到高产毛与优质毛的SNP位点及优势基因型。.通过本课题的实施，一方面从数量遗传学角度，获得准确的毛用性状遗传参数，为利用育种值评定细毛羊种羊遗传性能和进行候选基因的遗传效应分析奠定基础；另一方面从分子遗传学角度，在基因组 DNA和mRNA水平揭示了超细毛羊高产毛及产优质羊毛的分子机理，提高了标记辅助选择的准确性，对提高绵羊生产性能和增强我国养羊业的国际竞争力具有现实和战略意义。