iNKT细胞在炎症性早产中作用的研究

The most common cause of preterm delivery is infection. We have demonstrated that invariant natural killer T (iNKT) cells promote inflammation-induced preterm delivery by accelerating dendritic cells maturation and activation, T cells and NK cells activation, and Th1 cytokines secretion at the maternal-fetal interface. The aim of the present study is to investigate the role, mechanisms and effect targets of iNKT cells in inflammation-induced preterm delivery by use of iNKT cell-deficient Jα18-/- mice, isolation and adoptive transfer of iNKT cells, establishment of a murine model of preterm delivery by i.p. injection with lipopolysaccharide (LPS) and various specific blocking agents blocking immune recognition and critical steps in Toll-like receptor 4 (TLR4) signal transduction pathway.The incidences of preterm delivery and fetal death will be calculated. The percentages of blood and decidual iNKT cells and the expression of activation molecule CD69 will be analyzed by flow cytometry. Intracellular and extracellular Th1, Th2 and Th17 cytokine production will be measured by flow cytometry and cytometric bead array. The success of our study will be helpful in clarifing the pathogenesis of inflammation-induced preterm delivery and providing new ideas for preventing and curing inflammation-induced preterm delivery.

早产最常见的原因是感染。我们研究表明，恒定自然杀伤T（iNKT）细胞通过促进蜕膜树突状细胞的成熟和活化，T细胞和NK细胞的活化，Th1细胞因子的分泌，从而促进炎症性早产的发生。本课题拟在原有研究的基础上，利用体内缺乏iNKT细胞的转基因Jα18-/-小鼠，iNKT细胞的分离纯化和过继转移，小鼠腹腔注射脂多糖（LPS）建立的炎症性早产模型，特异性阻断技术选择性阻断免疫识别及Toll样受体4（TLR4）信号转导通路的各关键环节，体外小鼠iNKT细胞和树突状细胞共培养的细胞模型，以早产率、死胎率、小鼠蜕膜及血iNKT细胞比率和活化分子CD69的表达、细胞内外Th1、Th2和Th17等细胞因子水平为切入点，探讨iNKT细胞在TLR4介导的炎症性早产中的作用、作用机制及其效应靶点。本课题的成功将为阐明炎症性早产的发病机制提供实验依据，为防治炎症性早产的发生提供新思路。

早产最常见的原因是感染。我们研究表明，恒定自然杀伤T（iNKT）细胞通过促进蜕膜树突状细胞的成熟和活化，T 细胞和NK 细胞的活化，Th1 细胞因子的分泌，从而促进炎症性早产的发生。本课题拟在原有研究的基础上，利用体内缺乏iNKT 细胞的转基因Jα18-/-小鼠，iNKT 细胞的分离纯化和过继转移，小鼠腹腔注射脂多糖（LPS）建立的炎症性早产模型，特异性阻断技术选择性阻断免疫识别及Toll 样受体4（TLR4）信号转导通路的各关键环节，体外小鼠iNKT 细胞和树突状细胞共培养的细胞模型，以早产率、小鼠蜕膜及血iNKT 细胞比率和活化分子CD69 的表达、细胞内外Th1、Th2 和Th17 等细胞因子水平为切入点，探讨iNKT 细胞在TLR4 介导的炎症性早产中的作用、作用机制及其效应靶点。我们研究结果发现，小鼠腹腔注射LPS显著增加小鼠早产率，但并不增加体内缺乏iNKT细胞的Jα18-/-小鼠的早产率。iNKT细胞的过继转移能明显增加腹腔注射LPS的Jα18-/-小鼠的早产率。阻断性anti-TLR4，anti-CD1d，anti-IL-12，anti-IL-18，p38 阻断剂SB203580和ERK阻断剂PD98059均能显著抑制LPS所致的蜕膜iNKT细胞比率增加和活化分子CD69的表达，细胞内IFN-γ的分泌。LPS激活的树突状细胞促进蜕膜iNKT细胞表面CD69的表达和细胞内因子IFN-γ的分泌。体外预先添加anti-TLR4，anti-CD1d，anti-IL-12，anti-IL-18，p38 阻断剂SB203580和ERK阻断剂PD98059均能显著抑制LPS激活的树突状细胞所致的蜕膜iNKT细胞活化分子CD69的表达和细胞内IFN-γ的分泌。研究结果表明，蜕膜iNKT细胞活化在炎症性早产的发生中具有重要作用；而蜕膜iNKT细胞的活化需要TLR4介导的MAPK p38 和ERK通路，炎性因子IL-12和IL-18的分泌，以及CD1d递呈内源性糖脂抗原。