Th17细胞和调节性T细胞失衡在iNKT细胞介导的炎症性流产中的作用

Infection induces immune activation at the maternal-fetal interface, and is the important cause of miscarriage. We have demonstrated that lipopolysaccharide (LPS), the ligand of Toll-like receptor 4 (TLR4), induces miscarriage by promoting decidual invariant natural killer T (iNKT) cell activation and intracellular IFN-γ and IL-17 production. The aim of the present study is to investigate the molecular mechanisms of decidual iNKT cells indirectly recognizing LPS, and the role and the mechanisms of disregulation of Th17 cells and regulatory T cells in iNKT cell-mediated inflammatory miscarriage by use of iNKT cell-deficient Jα18-/- mice, establishment of a murine model of miscarriage by intraperitoneal injection with LPS, various specific blocking agents, isolation and adoptive transfer of immune cells, and in vitro cell culture and co-culture models. The embryo resorption rates will be calculated. The percentages of iNKT cells, Th17 cells and regulatory T cells at the maternal-fetal interface will be analyzed. Intracellular and extracellular cytokine production and the expression of transcription factors will be measured. The cell function will be examined. The success of our study will be helpful in clarifying the pathogenesis of inflammation-induced miscarriage and providing new ideas for preventing and curing inflammation-induced miscarriage.

感染可引起母-胎界面的免疫活化，是流产发生的重要原因。我们利用小鼠腹腔注射Toll样受体4（TLR4）配体脂多糖（LPS）的炎症性流产模型，已经证实LPS能够促进蜕膜恒定自然杀伤T（iNKT）细胞的活化和iNKT细胞内IFN-γ和IL-17的分泌，诱导流产发生。本课题拟在原有研究的基础上，利用体内缺乏iNKT细胞的转基因Jα18-/-小鼠，小鼠腹腔注射LPS的炎症性流产模型，特异性阻断技术，免疫细胞的分离纯化和过继转移，体外细胞培养和共培养的细胞模型，以胚胎吸收率，母-胎界面iNKT细胞、Th17细胞和调节性T细胞比率、细胞内外细胞因子水平、转录因子的表达和细胞功能为切入点，探讨蜕膜iNKT细胞间接识别LPS的分子机制，及Th17细胞和调节性T细胞失衡在iNKT细胞介导的炎症性流产中的作用及其作用机制。本课题的成功将为阐明炎症性流产的发病机制提供实验依据，为防治炎症性流产的发生提供新思路。

感染可引起母-胎界面的免疫活化，是流产发生的重要原因。本课题利用体内缺乏iNKT细胞的转基因Jα18-/-小鼠，小鼠炎症性流产模型，特异性阻断技术，免疫细胞的分离纯化和过继转移，体外细胞培养和共培养的细胞模型，以胚胎吸收率，母-胎界面iNKT细胞、Th17细胞和调节性T细胞比率、细胞内外细胞因子水平和细胞功能为切入点，探讨蜕膜iNKT细胞间接识别LPS的分子机制，及Th17细胞和调节性T细胞失衡在iNKT细胞介导的炎症性流产中的作用及其作用机制。我们研究结果发现，小鼠腹腔注射α-galactosylceramide (aGC)显著增加小鼠流产率和蜕膜iNKT细胞的活化，但并不增加体内缺乏iNKT细胞的Jα18-/-小鼠的流产率，表明iNKT细胞在炎症性流产中具有重要作用；利用小鼠腹腔注射αGC建立的炎症性流产模型，过继转移iNKT细胞显著增加Jα18-/-小鼠流产率以及血清Th1细胞因子水平，进一步说明iNKT细胞的活化在炎症性流产中具有重要作用；iNKT细胞除了可以直接由其配体αGC激活外，还可以间接识别LPS。LPS通过TLR4信号通路的p38和ERK 通路及炎性细胞因子IL-12和IL-18的分泌介导蜕膜iNKT细胞的活化，诱导母胎耐受失衡 ；腹腔注射αGC显著降低小鼠蜕膜Treg细胞比率，并抑制其功能，提示Treg细胞数量减少及功能失调可能在炎症性流产中具有一定作用。过继转移蜕膜Treg细胞能明显抑制αGC所致的胚胎吸收，进一步说明蜕膜Treg细胞在诱导母胎耐受中的作用，其功能失衡可能加剧炎症性流产的发生；体外共培养实验表明，活化的蜕膜NKT细胞能够抑制蜕膜Treg细胞分泌功能性细胞因子，并且降低其调节功能；LPS可能通过促进蜕膜树突状细胞的增殖和细胞内IL-6和IL-23的分泌，促进蜕膜Th17细胞的生成；iNKT细胞在某种程度上通过促进LPS介导的蜕膜树突状细胞的增生和细胞内IL-6和IL-23的分泌，以及蜕膜Th17细胞的生成，在炎症性流产的发生中具有一定的作用。