人源含硒单链抗体酶的催化机理研究

含硒的谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）是机体抗氧化防御体系的关键酶，它能清除体内活性氧，防止细胞过氧化损伤，治疗由活性氧引起的各种疾病，如早老症、心脑血管疾病等。然而，由于天然GPX的来源有限、稳定性差，致使GPX模拟物的研究备受关注，含硒抗体酶是GPX模拟物的一个突出代表。本项目是在获得活力达到天然GPX数量级水平的人源含硒单链抗体酶基因序列的基础上，通过在基因的3′端非翻译区引入硒代半胱氨酸（SeCys）插入序列，用真核表达载体在哺乳类细胞中直接表达在底物结合部位含有天然GPX催化基团- SeCys的人源含硒单链抗体酶。再结合序列比对、计算机模拟、抗原-抗体分子拟合分析，用定点突变法改变底物结合部位的关键氨基酸，调整底物结合口袋的大小、极性、催化基团的位置和在活性中心引入催化三联体的方法，研究突变位点与酶活性的关系，阐明人源含硒单链抗体酶的催化机理。