卵巢癌患者外周血肿瘤来源exosome的分离及其肿瘤标志分子的鉴定

【目的】从卵巢癌患者外周血分离肿瘤来源的exosome，寻找其携带的肿瘤标志物，探讨其作为卵巢癌筛查和早期诊断工具的可行性。【方法】以卵巢癌患者为研究组，以良性卵巢肿瘤患者为配对对照组，健康女性为正常对照组。采集上述3组对象的外周血，通过MACS分离外周血肿瘤来源exosome。获取卵巢癌组织、良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织和exosome的总蛋白质、mRNA和miRNA。通过双向电泳和串联质谱、DNA芯片和miRNA芯片，寻找在癌组织和exosome高表达，但在良性肿瘤和正常卵巢组织低表达或不表达的蛋白质、mRNA和miRNA。【预期目标】找到肿瘤来源的exosome携带的在癌组织高表达，而在良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织低表达或不表达的分子组分。【工作意义】外周血肿瘤来源exosome作为一种新的、无创的筛查和早期诊断卵巢癌的工具，有助于提高早期卵巢癌的检出率，从而改善卵巢癌患者的预后。

exosome是包括肿瘤细胞在内的多种细胞分泌的纳米级生物囊泡，其携带有母细胞的蛋白质和RNA成分。exosome参与了多种细胞生物学过程，目前认为是细胞间互相通讯的重要工具。比较正常细胞和肿瘤细胞来源exosome的异同，有助于理解肿瘤发生发展的复杂机制。. 本研究从卵巢癌患者和健康女性志愿者外周血中分离循环exosome，同时从2株卵巢癌细胞系（OVCAR-3和IGROV1）培养上清中分离细胞特异性exosome。通过iTRAQ联合色谱和质谱技术鉴定不同来源exosome含有的蛋白质组分，通过基因芯片分析不同来源exosome携带的mRNA。. 结果显示，从卵巢癌患者外周血、健康志愿者外周血和卵巢癌细胞系培养上清中均分离出exosome。通过蛋白质组学方法发现，卵巢癌细胞系来源的exosome负载了2230种蛋白，其中380种是国际exosome分子数据库ExoCarta database尚未收录的。在人体水平，卵巢癌患者外周血exosome和正常人外周血exosome负载的蛋白质中共有408个差异蛋白，其中卵巢癌exosome中下调208个，上调200个。卵巢癌组织和正常卵巢组织之间共有954个差异蛋白，其中下调480个，上调474个。在这些差异蛋白中，癌/正常exosome和癌/正常组织共有的差异蛋白共有11个。这11个差异蛋白有成为卵巢癌标志分子的潜力。通过基因芯片发现，相对于健康志愿者外周血exosome，卵巢癌患者外周血exosome负载的miRNA成分中上调基因数为17个，下调基因数为35个。上调的17个miRNA参与了多种细胞通路，执行复杂的生物学功能。这17个上调的miRNA作为卵巢癌标志分子的潜力值得进一步研究。. 今后可以通过扩大样本量、利用分子流行病学的方法来验证本研究的获得的结论。例如，在更大规模的卵巢癌患者和健康志愿者中比较上述筛选出的11个差异蛋白的表达情况，以其找到一（数）个特异性和灵敏性最好的蛋白作为卵巢癌标志物；在卵巢癌细胞系和肿瘤组织水平检测差异miRNA表达，通过和本研究找到的差异miRNA进行比对，在更小的范围内寻找可以作为卵巢癌标志分子的miRNA组分。