增生性瘢痕相关基因P311在成纤维细胞中的作用及机理的初步研究

瘢痕形成及其调控机制研究，是创伤基础领域的焦点之一。我们过去运用基因芯片筛选出P311基因在增生性瘢痕组织成纤维细胞中高表达现象。该基因可能在增生性瘢痕形成的过程中起着重要作用。本项目拟通过真核表达系统获取P311蛋白抗原，免疫家兔后制备抗P311多克隆抗体；免疫组化观察P311蛋白在不同时期增生性瘢痕中的定位表达分布；以酵母双杂交钓取与P311相互作用蛋白；构建强制表达P311质粒，转染瘢痕组织来源成纤维细胞，筛选出阳性细胞，用抗P311多抗进行免疫印迹验证，建立可诱导的稳定强制表达P311成纤维细胞株；另外，采用RNA干扰技术，构建能在细胞内表达小干扰RNA、特异沉默P311基因的重组质粒，转染成纤维细胞，建立稳定下调表达P311成纤维细胞株。观察成纤维细胞分泌胶原、细胞因子以及在体外凝胶系统中的收缩作用的变化；了解P311基因在瘢痕成纤维细胞中的作用及其机制。