构建无细胞转录-翻译系统研究外切纤维素酶的合成机制

经聚合酶反应扩增得到外切纤维素酶I的基因在偶联转录—翻译的兔网织红细胞系统中成功得到表达，产量达21微克/毫升。证实未经糖基化修饰的外切纤维素酶I仍具有原酶相近的活力和特异性。表明纤维素酶基因在无细胞体系中得到正确转录和翻译。在建立的无细胞转录—翻译系统中对不同碳源对外切纤维素酶I、II合成的调控机理在分子水平上进行了研究。发现碳源的调控发生在转录水平，外切纤维素酶I、II的合成均受纤维素的诱导和葡萄糖的阻遏、但槐糖只对木霉有诱导作用。凝胶阻滞试验表明，木霉和曲霉外切纤维素酶基因启动子上存在两种不同的核酸基元各与细胞内的调控蛋白相互作用，以激活或阻遏纤酶基因的表达。