miR-3934调控胸膜间皮细胞上皮-间充质转化在胸膜纤维化发生中的作用

Once Pleural fibrosis（PF）starts, it is difficult to stop and impossible to reverse. So far, there has been no effective treatment for PF. Pleural mesothelial cell (PMC) is the predominant cell type in pleural cavity, and plays a pivotal role in PF. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is an important mechanism for fibrotic diseases. We have demonstrated that PMCs actived by bleomycin undergo EMT, and participate in the fibrotic process of pleural. Finding the key factors that regulate the EMT of PMC may lead to an important advance in the treatment of PF. Our preliminary experiments using miRNA microarray chip technology shows miRNA-3934 expression is significantly upregulated in the treatment of bleomycin, which may participate in PF. Consequently, cell model, animal model ,and clinical specimen will be used for our investigation, which may demonstrate our innovative hypothesis"miRNA-3934 regulates the EMT of PMC and participates in the fibrotic process of pleura". This project will provide theoretical and research support and a new target for PF therapy.

胸膜纤维化一旦形成、难以逆转，目前尚无针对性的治疗手段。胸膜间皮细胞是胸膜的主要成分，也是胸膜纤维化发生的核心所在。上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）是纤维化发生的重要机制，我们前期研究已经证实胸膜间皮细胞在博来霉素的作用下可发生EMT，并参与胸膜及胸膜下肺纤维化的发生。如能找到调控胸膜间皮细胞发生EMT的关键因子，则有望在防治胸膜纤维化中取得重要进展。预实验中，我们利用microRNA表达谱芯片技术，检测发现在博来霉素作用下microRNA-3934显著上调，并可能参与胸膜纤维化。因此，本项目拟利用细胞模型、动物模型及临床标本展开研究，从而验证“microRNA-3934调控胸膜间皮细胞EMT，参与胸膜纤维化的发生发展”的创新性假说，研究结果可为胸膜纤维化的防治提供新的靶点。

胸膜间皮细胞（PMC）是胸膜的主要细胞，PMC通过发生间皮-间充质转化参与胸膜纤维化的发病过程。miRNA与纤维化疾病的发生关系密切，我们根据前期的预实验显示，提出miR-3934可能参与胸膜纤维化的发生。但是我们在2017年度的研究发现，过表达miR-3934不引起小鼠胸膜纤维化，并在细胞水平抑制TGF-β1信号通路和胶原的合成。因此，我们从2018年度起，将研究重点转向miR-4739在胸膜纤维化发生中的作用，并进行了从分子、细胞、动物到临床标本的相关研究。主要研究结果：1. micro-RNA芯片结果显示博莱霉素处理胸膜间皮细胞系MET-5A 可引起miR-4739表达升高；2. 博莱霉素介导PMC的TGF-β1分泌增加，TGF-β1通过增强pri-miR-4739启动子的活性，上调miR-4739的表达；3. miR-4739介导PMC的MMT、I型胶原合成、增殖和迁移；4. 在临床胸膜纤维化标本中，miR-4739高表达而BMP-7低表达；5. miR-4739靶向结合BMP-7并打破Smad1/5/9和 Smad2/3信号之间的平衡；6. BMP-7-Smad1/5/9通过调节E-cadherin和collagen-I的启动子的活性，介导MMT和collagen-I的生成；7. 过表达miR-4739诱导小鼠胸膜纤维化；8. BMP-7能够抑制博莱霉素介导的小鼠胸膜纤维化。本项目明确了miR-4739/BMP-7-Smad1/5/9轴在胸膜纤维化发生中的重要作用，为临床病人的防治提供新的思路和靶点。