miR-18a调节胸膜间皮细胞的上皮间充质转化防治特发性肺纤维化的实验研究

Idiopathic Pulmonary Fibrosis（IPF ） is a lung disease characterized by unknown pathogenesis and refractory to treatment. The formation of fibroblast foci is an important pathological feature of IPF, myofibroblasts recruited from alveolar epithelial to mesenchymal transition (EMT) is the most important source of myofibroblast in the foci. As it more obvious that subpleura fibrois in the lung of IPF patient, the study on EMT in pleura is significant. Previous studies have shown that pleural mesothelial cells (PMC) undergo epithelial-mesenchymal transition (EMT) and contributes to the formation of pulmonary fibrosis. We have demonstrated that PMC actived by bleomycin undergo EMT, and the expression of miRNA-18 showed down-regulated in this process.By retreogulating miRNA-18 in PMC, can EMT be reversed? If so,subpleura pulmonay fibosis may be mitigated.Through constructing miR-18a virus vector and prcessing PMC with it, we can observe the Histopathological findings of PMC undergoing EMT. Through making anti-miR-18a antisense oligodeoxynucleotide ,the molecular mechanism of reversing EMT mediated by up-regulating miR-18a-5p can be explored. And so can we find new target spot cure IPF.

特发性肺间质纤维化（IPF）是发病机制尚未十分明了的疾病，目前无有效治疗药物。成纤维灶的形成是其重要的病理特征，其中，由肺泡上皮细胞向间充质转化(EMT)而形成的肌成纤维细胞是灶内肌成纤维细胞的重要来源 。由于IPF胸膜下的纤维化改变较为明显，因此，研究胸膜局部的EMT的意义显得尤为重要。研究提示胸膜间皮细胞（PMC）以EMT的机制参与肺纤维化的发病过程。我们通过前期实验证实PMC在博来霉素的作用下可发生EMT的病理改变，并在此过程中出现miRNA-18下调，那么，反向调节miRNA-18是否可逆转胸膜间皮细胞EMT从而减轻胸膜下肺纤维?我们将构建miR-18a慢病毒载体并以此处理PMC，观察其调节胸膜间皮细胞EMT的病理生理改变，并制备抗miR-18a反义寡核苷酸，探索上调miR-18a-5p逆转胸膜间皮细胞EMT的分子机制，为治疗IPF寻找新的靶点奠定理论及实验依据。

特发性肺间质纤维化（ IPF）是发病机制尚未十分明了的疾病，目前无有效治疗药物。成纤维灶的形成是其重要的病理特征，其中，由肺泡上皮细胞向间充质转化(EMT).而形成的肌成纤维细胞是灶内肌成纤维细胞的重要来源 。由于 IPF 胸膜下的纤维化改变较为明显，因此，研究胸膜局部的 EMT 的意义显得尤为重要。研究提示胸膜间皮细胞（ PMC）以 EMT 的机制参与肺纤维化的发病过程。本课题拟反向调节 miRNA-18 可逆转胸膜间皮细胞 EMT 从而减轻胸膜下肺纤维。进行了细胞实验及整体实验，采用细胞划痕试验，RT-PCR、western-blot、免疫组化及免疫荧光等实验方法，通过构建 miR-18a 慢病毒载体并以此处理PMC，观察到与空载体组比较， miR-18a 慢病毒载体能增强胸膜间皮细胞迁移能力，促进PMC发生EMT。通过制备抗 miR-18a 反义寡核苷酸并以此处理PMC，观察到与博来霉素处理组比较，上调 miR-18a-5p可 逆转胸膜间皮细胞 EMT，且miR-18a-5p通过上调TGF-βRII基因表达，活化TGF-β/Smad2/3这一信号通路参与胸膜间皮细胞 EMT的过程。因此，我们认为，miR-18a-5p的下调介导了胸膜下纤维化的发生，而miR-18a-5p的过表达可能成为IPF的潜在治疗手段。