调肝降脂方对CYP7A1信号通路调控作用机制研究

申请人经系统研究提出"调肝降脂"新学说，认为"肝"是高脂血症发病的关键脏腑，"肝失疏泄"是其关键病机，并据此研制调肝降脂方药"复方贞术调脂方"（FTZ）治疗高脂血症，证明安全有效。我们前期研究发现FTZ上调胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）是其"调肝降脂"重要机制，还发现其对CYP7A1的上游调控因子HNF4α、FXRα分别有上调、下调作用。但FTZ调节CYP7A1的机制是否通过上述因子双向调节而实现？为此，本项目拟采用RNA干扰技术沉默或特异性抑制剂阻断FXRα等的表达，观察特异性沉默或阻断相关调控因子后，FTZ及其不同组分对CYP7A1表达调控的影响，分析阐明FTZ上调CYP7A1表达的信号通路及其调控机制，同时阐明其作用物质基础，为阐明"调肝降脂"新学说及从"肝"论治高脂血症新策略提供科学依据，并为进一步的调脂中药活性成份筛选提供新靶点。

申请人经系统研究提出“调肝降脂”新学说，据此研制“复方贞术调脂方”（FTZ）防治高脂血症，安全有效。.利用大鼠等多种高脂血症动物和肝细胞模型、RNA干扰技术等分子生物学技术进行研究首次发现:.（1）.FTZ上调肝胆固醇代谢关键酶胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）,促进胆固醇转化成胆酸排泄是其“调肝降脂”重要机制，并与调节核转录因子HNF4α、LXRα、PPARα、FXRα、SREBP1c有关。.（2）君药佛手主要成分--橙皮苷能上调肝细胞CYP7A1、促进胆固醇代谢成胆酸，并与上调HNF4α、LXRα、PPARα蛋白表达正相关。.（3）臣药黄连主要部位黄连生物碱及其主要成分小檗碱能显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C水平；至少部分是由于：小檗碱 ①通过上调LXRα、PPARα、HNF1α基因蛋白表达，下调FXRα和SREBP1c，进而上调CYP7A1,促进胆固醇转化成胆酸排泄;②能抑制肠道和肝脏的固醇类吸收的关键蛋白NPC1L1的表达，抑制胆固醇脂化，减少胆固醇类的吸收，增加排泄、最终降低肝脏和血清胆固醇；这些作用与其促进核因子LXRα相关。这是黄连生物碱和-小檗碱降胆固醇作用的新机制。.（4）臣药三七主要成分人参皂苷Rb1、Compound K和臣药女贞子主要成分齐墩果能上调肝细胞LXRα，并上调CYP7A1。.（5）siRNA干扰抑制LXRα、HNF4α、PPARα蛋白表达后，小檗碱，橙皮苷等对肝细胞CYP7A1上调作用大部分被阻断。说明FTZ通过多种成分同时调节HNF4α、PPARα、LXRα、HNF1α、FXRa和SREBP1c等多个核因子靶点，然后上调CYP7A1表达，促进胆固醇转化成胆酸代谢。.(6)改善胰岛素抵抗作用研究,发现FTZ及齐墩果酸可下调胰岛素抵抗肝细胞TNF- 和 IL-6表达、上调PI3K、p85GLUT4和IRS1蛋白表达；升高MS大鼠脂肪组织PI3K p85表达，降低体重和血甘油三酯，胆固醇及空腹血糖，改善胰岛素抵抗。.本项目发表研究论文9篇，其中SCI 5篇、获授权发明专利4项，阐明FTZ上调CYP7A1表达的信号通路机制及其物质基础，为阐明“调肝降脂”及从”肝“论治高脂血症新策略提供科学依据，并丰富发展了中医“调肝启枢化浊”创新理论的科学内涵。还为调脂中药活性成份筛选提供了新靶点。