调肝理脾方对酒精性肝纤维化前期细胞交互作用的调控机制

酒精性肝纤维化的四种主要效应细胞为肝细胞、枯否细胞、肝星状细胞和窦内皮细胞；在酒精性肝损伤阶段，上述细胞分泌的炎症因子和介质决定了纤维化的进程。具体表现：①肝细胞损伤→枯否细胞启动→肝星状细胞表型转化与激活→肝窦内皮细胞内吞；②肝细胞对话肝星状细胞；③枯否细胞对话肝星状细胞；④肝窦内皮细胞对话肝星状细胞。其中①为经典已知传递路径，本课题将验证①，同时创新确立②③④作为研究中心环节；拟在酒精性肝纤维化动物和细胞模型上，以维持自/旁分泌的致病/抗病因子平衡为线索，精确计量①②③④路径的中TGF的变化值，研究细胞对话之间的相互作用关系。明确其可能出现的正负调控因子相互影响的分泌浓度和安全阈值范围，以说明启动酒精性肝纤维化的机制及调肝理脾方药有效组分的保护机制和调控环节。

本课题通过使用中药复方调肝理脾方药的有效组分研究对大鼠酒精性肝纤维化的影响。确定其药理机制为围绕TGF-β1因子升高与回降来说明对大鼠肝脏细胞和分子修复机制。对比以往的做过的大鼠酒精性肝纤维化的复合灌胃造模方法，共进行3次实验。探索确立新的酒精浓度递进的造模方法。具体为“第1周起给予10%的酒精，第2周起中剂量和大剂量组增至20%酒精，第3周起大剂量增至30%的酒精，自由饮用36周”的造模方法并对其做出评价。分时观察各病理阶段的变化特征，得出大鼠成模的病理要素为低剂量和中剂量酒精组造膜率较高的结论。建立了改良的省略灌注链霉蛋白酶E的低速离心灌注法，提高了星状细胞产量与纯度。但仍在摸索肝细胞的培养新技术方法。建立“乙醛浓度在130-438umol/L范围干预星状细胞24小时”的离体造模方法。观察使用中药复方前后的酒精性肝纤维化大鼠一般生理指标及生化指标：AST、ALT、ALB 及GGTP和细胞因子TGF-β1的升高与回降变化范围。