基于PI3k-mTOR-p70S6k通路研究补肾解毒法对HBV感染免疫耐受患者pDC分泌干扰素的影响

Enhanced natural and specific immune response are focal and difficult to CHB treatment. pDCs is the bridge for the connection of natural immunity and specific immunity, witch can produce more than 95% of type I IFN. PI3K-mTOR-p70S6K pathway is the key pathway for pDCs generation IFN. PI3K,mTOR and P70S6K mRNA and protein expressions and pDCs supernatant IFN-α levels in pDCs PI3K-mTOR-p70S6K signaling pathway will be compared, respectively, in patients with HBV infection immune tolerance period and normal controlon. In order to explain the cause of PDCs produces lower IFN-α in patients with HBV infection in immune tolerance stage.Through the PI3K inhibitor LY294002 or mTOR inhibitor rapamycin in vitro intervention HBV infection immunity resistant patients pDCs, using the method of serum pharmacology, research by Bushen Jiedu method on HBV infection immune tolerant patients PI3K-mTOR-p70S6K signaling pathway PI3K and mTOR, P70S6K mRNA and protein expression of ring of Bushen Jiedu method of HBV infected patients in the immune tolerant stage pDCs effects of IFN-α secretion.

增强天然免疫和特异性免疫应答为CHB治疗的热点和难点。pDCs为连接天然免疫和特异性免疫的桥梁，能产生体内95%以上的Ⅰ型IFN。PI3K-mTOR-p70S6K通路为pDCs产生IFN的关键通路。本研究比较HBV感染免疫耐受期患者与正常对照pDCs PI3K-mTOR-p70S6K信号通路中PI3K、mTOR、p70S6K mRNA及蛋白表达及pDCs培养上清IFN-α水平，阐述HBV感染免疫耐受期患者pDCs产生IFN-α功能低下的原因；通过PI3K抑制剂LY294002或mTOR抑制剂雷帕霉素体外干预HBV感染免疫耐患者pDCs，运用血浆药理学方法，研究补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期患者PI3K-mTOR-p70S6K信号通路中PI3K、mTOR、p70S6K mRNA及蛋白表达的影响，探讨补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期患者pDCs分泌IFN-α的影响。

HBV感染者存在机体免疫功能受损，不能有效清除病毒是HBV持续感染的重要原因，恢复机体免疫功能对治疗HBV 感染有重要意义。pDCs是机体重要的免疫细胞，能产生体内 95%左右的Ⅰ型干扰素，并能提呈抗原激活特异性免疫系统，在抗病毒中起着重要作用。pDCs产生IFN-α过程需要PI3K-mTOR-p70S6k信号通路的参与。补肾解毒法能促进慢性HBV感染患者DCs功能的恢复。本实验比较了乙型肝炎免疫耐受期产妇与正常产妇pDCs中PI3K、mTOR、p70S6K及培养上清IFNα表达情况。观察补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中PI3K、mTOR、p70S6k及IFN-α表达的影响。在此基础上，进一步研究PI3K-mTOR-p70S6K信号通路抑制后，补肾解毒法对PI3K-mTOR-p70S6K信号通路中PI3K、mTOR、p70S6K及TLR9-MyD88-IRF-7-IFN-α信号通路中TLR9、IRF-7的表达及pDCs分泌干扰素-α的影响。研究发现，HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中PI3K、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平及培养上清IFNα水平较正常产妇明显下降。以HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs为研究对象，用补肾方及补肾解毒方含药血清干预后，pDCs中PI3K、mTOR、p70S6k mRNA及蛋白表达增加，IFN-α升高，其中补肾解毒方升高更明显，表明补肾方及补肾解毒方能提高HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中PI3K、mTOR、p70S6k mRNA及蛋白表达水平，促进IFN-α分泌，改善机体免疫功能，且补肾解毒方效果优于补肾方。PI3K-mTOR-p70S6K信号通路抑制后（予PI3K高效选择性抑制剂LY294002及mTOR特异性抑制剂雷帕霉素干预），补肾解毒法能激活HBV感染免疫耐受期患者pDCs PI3K-mTOR-p70S6K信号通路，进而激活TLR9-MyD88-IRF-7-IFN-α信号通路，促进pDCs分泌干扰素-α，恢复HBV感免疫耐受期患者机体的免疫功能。该研究揭示了HBV感染慢性化的可能机制，为临床应用补肾解毒法、通过免疫调节治疗慢性HBV感染者提供了理论依据，为慢性乙型肝的治疗提供了新思路。