翻译启始因子eIF3a基因表达和功能突变调控肺癌铂类药物化疗敏感性的分子机制及预后的临床意义

真核生物翻译起始因子eIF3a与肿瘤细胞分化与增殖、正常细胞向恶性表型转化以及与肺癌的发生相关。我们前期工作发现eIF3a在肺癌组织中特异性高表达，它可以负调控DNA修复酶的活性，导致其高表达的细胞对于铂类药物的化疗更为敏感。利用pyrosequence查明大样本人群中4个新多态性位点11279 G>A, 1458C>T, 29671G>A 和 2554G>A的分布频率，明确这些多态与肺癌铂类药物化疗敏感性及预后的相关性；利用定点诱变和Gel Shift法明确上述多态是否影响DNA剪切修复蛋白XPA, XPC 和RPA70, 32, 14的表达；再通过构建稳定表达细胞株、siRNA干扰和荧光素酶报告基因法阐明eIF3a调控下游蛋白的分子机制。本课题旨在阐明eIF3a基因表达和基因突变与肺癌化疗敏感性和预后的关系，为进一步认识eIF3a在肺癌治疗中的作用和提高肺癌治疗水平拓展新的思路。

背景：真核生物翻译起始因子eIFs与肿瘤细胞分化与增殖以及肺癌的发生相关。我们的前期研究发现真核细胞翻译起始因子的一个成员eIF3a的表达和肺癌化疗效果密切相关；并发现eIF3a可以负调控DNA修复酶的活性，从而导致eIF3a高表达的细胞对于基于铂类药物的化疗更为敏感。.研究内容：本课题将首先明确eIF3a基因表达和功能性突变与肺癌的诊断和预后的相关性，然后进一步探讨eIF3a对下游基因调控的分子机制，从而为寻找肺癌的新诊断标志物和治疗新靶点提供理论依据和实验依据重要结果及关键数据：.1. eIF3a多态性与肺癌铂类药物的化疗敏感性及预后的关系已完成，发表相关文章2篇；.1.1 以收集到的283例非小细胞肺癌患者样本为基础，我们着重研究了eIF3a的基因多态性与非小细胞肺癌患者的铂类药物化疗毒副反应的相关性研究。.1.2 通过HapMap软件筛选了eIF3a的127个SNP位点，并在在325例非小细胞肺癌患者的血液样本中提取DNA进行了基因分型发现，rs1409314, rs4752219, rs4752220 和 rs7091672这4个SNP位点与非小细胞肺癌的铂类药物化疗引起的毒副反应有关，特别是rs10510050 对铂类药物化疗引起的血毒性，胃肠道反应以及肝毒性显著相关。.2. eIF3a调控下游蛋白的分子机制研究已完成发表相关文章2篇。.通过构建一系列双荧光素酶报告基因，我们研究了RPA2基因通过内部核糖体结合位点及eIF3a发挥了翻译水平上的调节作用。RPA2的表达在翻译水平上受到IRES活性和eIF3a的调节，并且这种翻译水平上的调节作用于细胞的DNA损伤和修复有关。.3. 体外构建了EIF3a的2个突变型载体，通过Western以及RT-PCR发现1458C>T和 2554G>A这2个多态位点不仅影响eIF3a蛋白的表达，还影响细胞的迁移和增殖。取得相关专利2项。.4. 发明了一种检测与肺癌易感性及化疗敏感性相关基因的多态性的试剂盒。.科学意义：本课题率先证明了eIF3a基因多态与肺癌化疗疗效及毒副反应的相关性，为寻找肺癌的新诊断标志物和治疗新靶点，为提高肺癌的早期诊断和化疗疗效提供理论依据和实验依据；为进一步认识eIF3a在肺癌治疗中的作用和提高肺癌治疗水平拓展新的思路。