活化B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤NFκB信号传导通路基因突变及其在CD20靶向治疗中的意义

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是侵袭性淋巴瘤最常见的病理类型，包括GCB、ABC和NC几个亚型，ABC型DLBCL预后很差。最近发现ABC型DLBCL的特征是淋巴瘤细胞NFkB信号传导通路持续性活化，该活化与信号传导通路中的关键分子CARD11、CD79及A20等基因突变有关，但仍有很大一部分ABC型DLBCL未发现上述突变，提示NFκB信号通路活化还存在其它机制。本研究将检测CARD11、CD79和A20基因在本研究人群中的突变率，并检测NFκB信号通路中一些其它关键分子IκB、IKK是否存在基因突变，研究新发现突变对该信号通路的影响。随着CD20单克隆抗体Rituximab临床应用，部分DLBCL的预后得到改善，研究发现主要是ABC型DLBCL能从Rituximab治疗中获益。因此我们推测Rituximab作用机制可能与抑制NFκB信号传导通路有关，本研究将会对此进行探讨。

一、70例患者A20，CARD11，CD79A，CD79B和IKKγ基因突变情况.1.CARD11基因突变有6例，突变率8.57%；其中5例出现在non-GCB亚型，1例出现在GCB亚型；所有突变均为点突变，分布在5-9外显子，其中5号外显子2例，6、7、8、9号外显子各1例。.2.A20基因突变有20例，突变率28.57%；其中15例出现在non-GCB亚型，5例出现在GCB亚型；突变类型包括点突变和缺失突变，其中缺失突变10例，缺失突变主要发生在3、7-9号外显子；点突变10例，其中2例错义突变，1例无义突变，1例插入突变，3例同义突变，3例复杂突变（含2个突变位点）。.3. CD79b基因突变有7例，突变率10%；7例均出现在non-GCB亚型；所有突变均为点突变，其中5号外显子2例，6号外显子5例。.4.CD79a基因突变有1例，为缺失突变，位于5号外显子。.5. IKKγ基因未检测到突变。.二、临床研究发现A20 突变不能预测活化中心型弥漫大B细胞淋巴瘤预后.A20突变组和非突变组的治疗完全缓解率分别为35%和45.8%，中位生存期为 24.0 月 vs 30.6 月(P=0.740); 中位无进展时间为15月 vs 17.4 月 (P =0.618). 差异均无统计学意义。.三、利用cDNA Microarray技术探讨Rituximab耐药机制.1.在耐药细胞Jeko-1/R 和 Raji/R鉴定了201 个差异表达基因（与亲本细胞比较），其中70 个基因上调，42 个基因下调。.2.KEGG通路分析发现Jeko-1/R细胞 MAPK 和 TGF-beta 信号通路富集， Raji/R 细胞B-cell 受体信号通路富集，由于.MAPK 信号通路位于B-cell 受体信号通路 下游，因此推测介导美罗华耐药的关键信号通路为BCR/MAPK。.3. GO term 分析耐药和非耐药差异表达基因，发现富集在抗凋亡，血管生成，细胞蛋白定位，糖蛋白协同处理。.四、联合靶向CD20和BCR信号通路治疗淋巴瘤的体外研究.利妥昔单抗联合BCR抑制剂Ibrutinib靶向治疗淋巴瘤，与单药治疗相比，可显著增强对淋巴瘤Jeko-1细胞的增殖抑制作用，促使细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤效应。