腺苷脱氨酶参考系统的研究

Adenosine deaminase (ADA) is one of the key enzymes in nucleotide metabolism, it’s an important indicator in the laboratory diagnosis of various diseases. However, there are so many brands of the detection kits in clinical use and the results of these kits are much different from each other, because there’s no reference system for them to trace to. Establishment of reference system for ADA could resolve this problem. There is no reference method for ADA in and out of China as well as reference material in China. There is a reference material, which was extracted from erythrocyte, however it’s lack of interoperability. The reference intervals in clinical use were based on small number of samples, they are different from each other. Reference method will be established as well as reference material and reference interval in this subject. The reference material and reference interval will be based on the establishing reference method. Active protein of ADA will be expressed by molecular cloning technology and high activity ADA serum will be collected for preparing interoperable reference materials. Reference interval will be based on Chinese population. In addition, through the value transfer from reference method and reference material to clinical system, standardization of clinical ADA measurements will be achieved.

腺苷脱氨酶（ADA）是人体核酸代谢关键酶之一，在临床多种疾病中具有重要的实验诊断价值。然而其临床检测试剂盒种类繁多，由于缺乏溯源性，各检测系统检测结果间差异较大，给临床诊疗带来困扰，建立ADA参考系统是解决问题的有效途径。目前国内外均无ADA参考方法的研究报道；国内无ADA参考物质，国外有从红细胞中提取的纯ADA蛋白参考物质，但缺乏互通性；临床上ADA参考区间为各厂家建立的小样本数据，相互之间存在差异。本课题拟建立酶偶联原理的ADA候选参考方法；在此基础上，以分子克隆手段表达ADA活性蛋白和收集临床ADA高值血清样本制备具有互通性的参考物质；同时建立基于候选参考方法的中国人群的参考区间，即建立完整的ADA参考系统。并且通过参考方法和参考物质的量值传递实现ADA临床检测标准化。

腺苷脱氨酶（ADA）是人体核酸代谢关键酶之一，在临床多种疾病中具有重要的实验诊断价值。然而临床检测试剂盒种类繁多，由于缺乏溯源性，各检测系统间结果差异较大，给临床诊疗带来困扰，建立ADA参考系统是解决问题的有效途径。本课题即建立了基于酶偶联原理的ADA候选参考方法，该方法的检测条件为检测温度37℃±0.1℃；检测波长：550±1nm；波宽10 mm±0.01 mm，光径≤ 2 nm，检测点≥6；孵育时间5min，延迟时间120s，监测时间180s；显著影响因子为：腺苷，黄嘌呤氧化酶，4-氨基安替吡啉，磷酸氢二钠。方法批内精密度和期间精密度变异系数均小于2%，说明方法性能稳定。方法的可检测线性范围为0.4-352U/L（△A≤0.17min-1）。该方法的抗干扰能力较强，甘油三酯≤3.39 mol/L，血红蛋白≤3.75 g/L，总胆红素≤85.5 umol/L，维生素C≤40 mg/L，甘草次酸和脱氧胆酸≤20 mg/L，黄芩素≤37.5 mg/L对方法无干扰。.在ADA候选参考方法的基础上，依据CLSI CA28-A3文件等建立了华南地区18-79周岁成人ADA参考区间为0-38.5U/L,样本分布中位数为20.2 U/L，均值的标准差为5.2 U/L，标准误为 6.399 U/L，N=649，90%高限的置信区间为38.1-38.9U/L。.方法的初步临床应用依据CLSI EP9-A2文件收集患者新鲜血清40份，选取临床常规系统Roche PPI Modular P800生化分析仪和迈克公司ADA检测试剂盒校准品。经Passing-Bablok统计方法分析，常规系统在校准前与参考方法在医学重要水平30 U/L 和200 U/L的偏移分别为：-44.3%和-37.9%，均超过了±15%的设定限值，不能为临床所接受。校准后与参考方法的偏移分别为：-2.6%和2.0%。说明经参考方法校准的临床常规系统与参考方法有很好的可比性和一致性。.同时本课题在该候选参考方法基础上，以分子克隆手段表达ADA活性蛋白以及收集临床ADA血清样本制备了均匀性和互通性良好，稳定性满足临床需要的参考物质，该标准物质的研制解决了国内外ADA缺乏标准物质的现状。同时本参考方法准备申请国际参考方法列表（JCTLM），可为全球ADA标准化和溯源性提供服务，对提高我国在该领域的声誉意义重大。