调节性和效应性T细胞亚群参与胆道闭锁发病及机制研究

近期文献报道及申报者前期研究显示：①胆道闭锁（BA）与围产期病毒感染触发自身免疫应答所致胆管进行性损伤相关；②调节性T细胞（Treg）在自身免疫性肝病发生中发挥重要作用，病毒组分与Toll样受体（TLR）结合可调控Treg细胞功能；③Th17细胞是参与自身免疫性炎症应答的主要效应性T细胞亚群，其与Treg间存在相互调节的网络。但有关Treg和Th17细胞参与BA发生的作用及其确切机制，尚未见研究报道。本项目研究目标为：①借助流式细胞术、RT-PCR、Western blot分析BA患儿及动物模型外周血和肝内胆管组织中Treg和效应性T细胞亚群的数量、功能改变，及免疫细胞TLR表达，以探讨BA的免疫学发病机制；②向BA动物模型输注Treg细胞或给予抗IL-6抗体，或以Foxp3基因敲除鼠为模型，调控Treg/Th17细胞分化和功能，观察对胆汁淤积发生和胆管损伤的影响，以探索防治BA的新策略。

目的：研究Treg和Th17细胞在胆道闭锁（BA）患儿免疫炎症发展中的作用；并通过小鼠模型，观察增加Treg细胞或降低Th17细胞对胆道闭锁发病的影响。方法：应用免疫组化、流式细胞术、QRT-PCR、免疫荧光检测患儿肝组织和外周血中Treg和Th17细胞的数量、相关细胞因子和转录因子表达水平，以及DC细胞TLR3、7、8的表达。体外细胞共培养实验研究细胞功能及分化。应用RRV病毒建立BA动物模型，腹腔输注Treg细胞或IL-6抗体，观察小鼠BA发生率及生存率，并检测Treg和Th17相关细胞因子和转录因子表达水平。结果：BA患儿组肝组织Treg和Th17细胞标志物显著高于对照组，P<0.05。BA组血清中Treg和Th17细胞相关细胞因子显著高于对照组，P<0.05。外周血Th17/CD4+T比例显著高于对照组，P<0.05；而Treg/CD4+T细胞比例无差异。体外细胞培养发现升高的IL-6与免疫细胞特别是DC细胞高表达TLR3、7、8有关，并且促进Th17细胞偏移。小鼠BA模型内Treg，Th17相关因子检测结果同人类相似，转输Treg细胞或IL-6抗体后，小鼠BA发生率显著降低，21天生存率增加。结论：Treg及Th17细胞在胆道闭锁的进行性炎症中发挥重要作用，通过增加Trge细胞数量，或通过IL-6抗体抑制Th17细胞分化，可以达到降低BA发病率、延长BA患儿生存时间的目的。