调控CCR7 的microRNA 分子在头颈鳞癌淋巴结转移中作用的研究

Recently, caner research focuses on the molecular mechanism and control methods of lymph node metastasis of cancer cell. In previous work, we have demonstrated that CCR7 can promote survival and metastasis of squamous cell carcinoma of head and neck cell by several molecules signal pathway, which can be inhibited by CCR7 siRNA transfection. The results indicate that CCR7 gene silencing may play a key role in inhibiting the metastasis of cancer cell. There have some methods to induce CCR7 gene silencing, and microRNA is one of them with the advantage of endogenous and stability. Therefore, we intend to screening the microRNAs targeting CCR7 by microarray and bioinformatics technology, identify these microRNAs in vivo and vitro, and evaluate the possibility of inhibiting tumor progress and lymph node metastasis by using microRNA silence CCR7 gene. The research results may provide theoretical foundation for targeted therapy to CCR7.

针对头颈鳞癌淋巴结转移的分子机制及其控制方法是众多学者研究的热点。本课题组经过前期工作已经证实，CCR7能够通过多条信号通路促进肿瘤细胞的生长和转移，CCR7 siRNA转染后上述作用被明显抑制，表明CCR7的基因沉默对于抑制肿瘤的转移起到积极的作用。本课题组希望在此基础上，对CCR7的基因沉默深入研究，以内源性、更稳定的microRNA为研究对象，采用基因芯片技术和生物信息学技术筛选出可能靶向CCR7的microRNA，并且进一步鉴定、验证，继而在组织水平找到该microRNA可能调节人头颈鳞癌表达CCR7及激活其下游信号分子的证据，通过体外实验和体内实验评价应用microRNA分子诱导CCR7基因沉默从而抑制头颈鳞癌发生、发展及淋巴结转移的可行性，为临床上可能针对CCR7基因的靶向治疗提供理论基础。

头颈鳞癌是头颈部恶性肿瘤的常见类型，经常在确诊时就已经发现患者区域性淋巴结转移，所以预后往往不佳。目前有关淋巴结转移的分子生物学机制仍不甚清楚。课题组以往的研究表明头颈鳞癌可以依靠CCR7及其下游信号通路的激活产生类似淋巴结归巢的淋巴结转移效果。.本研究是在以往工作的基础上对CCR7上调的机制进行研究。筛选、确定头颈鳞癌细胞中调控CCR7基因的miRNA分子miR-92b-3p、miR-125a-5p、miR-1275、miR-20a-5p、let-7b-5p和let-7e-5p，明确miR-92b-3p、let-7b-5p和let-7e-5p与CCR7靶向结合、负调控关系，明确miR-125a-5p、miR-1275、miR-20a-5p与CCR7的正向调节关系。在组织水平验证miR-92b-3p、miR-125a-5p、miR-1275、miR-20a-5p、let-7b-5p和let-7e-5p与人头颈鳞癌发生相关，与CCR7表达相关。JAK2/STAT3、MAPK、Pyk2、RhoA/ROCK等信号通路分子表达与CCR7表达呈相关性，与患者的转移及肿瘤分期相关。.通过体外细胞实验证实miR-92b-3p、miR-125a-5p、miR-1275、miR-20a-5p、let-7b-5p和let-7e-5p 通过CCR7调控头颈鳞癌细胞的生长及迁移、侵袭能力。CCR7对头颈鳞癌以上的调控作用是通过调节其下游JAK2/STAT3、MAPK、Pyk2、RhoA/ROCK等信号通路实现的。裸鼠体内试验再次证实let-7b-5p、let-7e-5p以及miR-92b-3p的上游转录因子SP1、CCR7的下游关键因子Pyk2对裸鼠体内肿瘤生长的影响。.本课题组通过体内外实验证明miR-92b-3p、miR-125a-5p、miR-1275、miR-20a-5p、let-7b-5p和let-7e-5p表达变化可能是头颈鳞癌高表达CCR7的重要机制，并对这些miRNA在SCCHN的发展和淋巴结转移中的作用进行深入研究，对调节这些miRNA的原因以及这些miRNA的下游其他靶基因进行了一定程度的探索，研究结果丰富了CCR7的基因调控机制及miRNA在头颈鳞癌中作用的研究，为头颈鳞癌的基因靶向治疗提供理论基础。