基因缺失诱变对VLDL受体结构与功能关系的探讨

本课题采用RT-PCR技术从中国人心肌细胞中克隆出中国人VLDL受体基因。经测序证实中国人VLDLRcDNA序列与有关报道不存在明显差异。采用基因缺失诱变技术构建了八个不同序列缺失的缺失重组体，并分别将其导入CHO细胞，经RT-PCR证实其可在细胞中有效表达。通过对标记的脂蛋白与转染了不同缺失重组体的细胞结合实验表明：当缺失重复序列3和重复序列4-5时，结合能力明显隆低，而缺失重复序列1和缺失重复序列7则降低不明显，初步阐明了VLDLR配体结合域中八个重复序列对脂蛋白结合的影响。在本课题中，我们改良了VLDL的分离及标记方法。新方法大大缩短了超离时间，标记的脂蛋白用于结合实验效果良好。