化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类药物耐药的分子机制研究

应用分子生物学实验技术，研究奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的分子机制。通过PCR扩增分离菌pbps基因，测定其基因序列，并对其进行RFLP分析，探究其基因型与耐药表型的关系；应用ECL Western-blotting检测耐药株、敏感株的青霉素结合蛋白（PBPs），探明不同耐药水平分离株PBPs表达产物变化情况，揭示化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的PBPs机制。通过Nitrocefin纸片显色法筛选产β-内酰胺酶（BLA）菌株，PCR扩增产酶菌株BLA基因，探讨BLA基因型与耐药表型的关系，揭示化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的BLA机制。β-内酰胺类抗生素是治疗化脓隐秘杆菌感染的首选药物。通过全面分析，阐明奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的PBPs和/或BLA机制，对预防化脓隐秘杆菌耐药性的产生及有效防治化脓隐秘杆菌感染性疾病具有重要意义。

完成奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌对12种β-内酰胺类抗生素耐药性检测与分析，完成奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌青霉素结合蛋白pbp4基因和pbpA基因的克隆与序列测定，并完成耐药基因变异与耐药表型间关系的分析。完成青霉素诱导耐药后的化脓隐秘杆菌ATCC19411耐药性的测定与分析，诱导耐药后pbpA基因变异及表达水平的分析。完成奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌β-内酰胺酶的检测。研究结果表明，所有化脓隐秘杆菌分离株及标准株ATCC19411均不产β-内酰胺酶，化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药可能单独由PBPs机制所介导。