利用转基因技术构建三氯乙烯药疹样皮炎动物模型

本项目拟开展疾病动物模型构建的基础性科研工作。职业接触三氯乙烯（TCE）引起的药疹样皮炎是一种化学性过敏反应性疾病，其临床表现与重症药疹相似，表现为严重的、全身性弥漫性皮肤红斑、丘疹，伴有水疱和大疱，眼、口腔、外生殖器黏膜损害，以及肝损伤。本项目针对目前免疫性疾病动物模型构建的难点，以TCE药疹样皮炎为代表，以HLA-B*1301基因与该病的强关联为突破口，应用基因组改造和化学诱导相结合的手段，利用HLA-B*1301/beta-2微球蛋白双转基因小鼠，建立真实模拟人类疾病的TCE药疹样皮炎动物模型；通过对TCE药疹样皮炎小鼠模型研究数据和临床结果的系统比较研究，验证疾病模型的有效性；为HLA-B类基因在体功能分析以及疾病发病机制探讨建立基础研究平台。

职业接触三氯乙烯（TCE）引起的药疹样皮炎是一种化学性过敏反应性疾病，其临床表现与重症药疹相似，表现为严重的、全身性弥漫性皮肤红斑、丘疹，伴有水疱和大疱，眼、口腔、外生殖器黏膜损害，以及免疫性肝损伤。本项目针对目前免疫性疾病动物模型构建的难点，以TCE药疹样皮炎为代表，以HLA-B*1301基因与该病的强关联为突破口，应用基因组改造和化学诱导相结合的手段，建立真实模拟人类疾病的TCE药疹样皮炎动物模型。本研究选择C57BL∕6品系小鼠，采用显微注射的方式将线性化的pUbC-HLA-B*1301重组质粒导入C57BL/6小鼠受精卵，并随机整合到小鼠基因组中。对首建鼠进行鉴定、繁育和筛选，获得HLA-B*1301蛋白稳定表达的转基因鼠。流式细胞术检测结果显示该转基因小鼠品系48.1%的脾淋巴细胞均表达HLA-B*13:01分子。以野生C57BL/6小鼠和HLA-B*1301转基因C57BL/6小鼠为模型鼠，应用三氯乙烯进行皮内注射联合皮肤斑贴的染毒方式进行诱导和激发，结果显示转基因小鼠发病率（93.9%）明显高于野生鼠（37.3%），且背部激发部位皮肤损伤严重程度评分显著高于野生鼠（2.28±0.78 vs. 1.68±0.67, P < 0.05）。转基因小鼠皮炎动物模型的皮肤病理组织学分析、免疫性肝损伤指标、淋巴细胞活化及增殖效应均与人类药疹样皮炎病例的临床检测指标相似。免疫过继实验结果显示，以转基因小鼠皮炎动物模型的淋巴细胞和血清过继给受体小鼠，其发病率（80%）高于单独接受淋巴细胞过继者（50%）以及单独接受血清过继者（0%），提示细胞免疫在药疹样皮炎的发病过程中起主要作用，体液免疫起一定的辅助作用。通过上述对转基因小鼠TCE药疹样皮炎动物模型研究数据和临床结果的比较，验证了本研究建立的疾病动物模型的有效性；为HLA-B类基因在体功能分析以及疾病发病机制探讨建立了基础研究平台。