miR-195调节的小胶质细胞自噬过程在神经疼痛中的作用及机制研究

Injuries of the nervous system often result in neuropathic pain. Increasing evidence suggests that autophagy is involved in the development of neuropathic pain by regulating neuron survival. However, little is known about its functional role and the underlying mechanisms in glia cells. Our previous study demonstrated that increased miR-195 could aggravate neuropathic pain followed with inhibition of autophagy. In vitro, miR-195 suppresses autophagy activation in spinal microglia. Based on these, we hypothesize that miR-195-mediated microglia autophagy may play a critical role in the development of neuropathic pain. To explore this hypothesis, we will examine the functional role and underlying mechanisms of miR-195-regulated microglia autophagy in neuropathic pain in the primary culture spinal microglia, Atg5-/- spinal microglia and rat neuropathic pain model using Real-time PCR, Northern blot, ELISA, Western Blot, FISH, IHC, Patch-clamp, EM, lentivirus infection, Luciferase reporter assay, Behavioral analysis of paw mechanical withdrawal thresholds, cold allodynia and rotarod test. These data will demonstrate a novel pathway of microglia autophagy regulating neuropathic pain, thus offering a new target for therapy of neuropathic pain.

神经损伤后常伴有神经疼痛的发生。许多证据显示自噬可通过调节神经元的存活参与这个过程，但对它在胶质细胞中的作用及机制还不清楚。我们已有的研究发现miR-195上调可加剧脊髓神经结扎模型中的神经疼痛并抑制自噬,同时在体外miR-195可调节小胶质细胞自噬。据此,我们提出:miR-195调节的小胶质细胞自噬可能在神经疼痛中发挥重要作用。为验证这一假说，我们将在原代小胶质细胞、 Atg5-/-自噬缺失小鼠的小胶质细胞、microglia/DRG共培和大鼠神经疼痛动物模型中采用Real-time PCR、Northern blot、ELISA、Western Blot、FISH、免疫组化、膜片嵌、电镜、慢病毒转染、荧光素酶报告基因分析及行为学分析深入探讨miR-195调节的小胶质细胞自噬在神经疼痛中的作用及机制。本研究将从小胶质细胞的自噬出发揭示神经疼痛的新机制，并为临床治疗提供合理的药物靶点。

神经疼痛广泛的发生于神经损伤过程中。尽管对于神经元在神经疼痛中的机 制进行了大量研究，目前还没有有效的治疗方法。许多证据显示自噬通过调节神 经元的存活参与神经损伤后神经疼痛，但对于它在胶质细胞中的作用及机制的研 究还不清楚。我们已有的研究发现 miR-195 在脊髓神经结扎后表达上调且这种上 调主要存在于小胶质细胞中,同时小胶质细胞的自噬受到抑制炎症反应增强。为 此，我们提出假说:miR-195 可能通过调节小胶质细胞的自噬过程在神经疼痛中 发挥作用。为验证这一假说:我们将通过原代培养的脊髓小胶质细胞和大鼠神经 疼痛模型，采用 Real-time PCR, Northern blot, ELISA, Western Blot, FISH，免疫组 化，脂质体转染，在体鞘内给药，萤光素酶实验，机械刺激缩足反应阈值和触摸 痛的行为学分析从分子，细胞以及动物整体水平探讨 miR-195 调节的小胶质细胞 自噬过程在神经疼痛中的作用并明确其作用机制。本研究将从小胶质细胞的自噬 出发揭示神经疼痛的新机制，并为临床治疗提供合理的药物靶点。