PD-1和Tim3信号途径在慢性HBV感染后iNKT细胞功能低下中的作用

长期以来在慢性HBV感染中CD8+T细胞的作用倍受重视，iNKT的作用一直被忽视。近年发现iNKT可不依赖传统CD4+和CD8+ T细胞而在体内直接抑制HBV复制；且慢性HBV感染后iNKT功能的下降一定程度上导致了HBV不能被彻底清除；此时iNKT的功能下降可能与其表面负性共刺激分子PD-1和Tim3表达上调有关。本课题拟通过对慢性HBV感染者体内iNKT数量、功能及表面PD-1和Tim3表达水平的研究，并首次尝试通过体外阻断iNKT上PD-1和Tim3信号以恢复iNKT的功能；并通过MHV-3(C3H) 慢性肝炎小鼠模型的体内实验分别和联合阻断这两个信号途径，尝试恢复iNKT的功能并观察对HBV复制的抑制作用。力图揭示PD-1和Tim3信号途径与慢性HBV感染后iNKT细胞低反应性的关系，探索iNKT在HBV慢性感染、疾病发生发展及临床抗病毒治疗中可能的作用，并探讨其免疫学机制。

长期以来在慢性HBV感染中CD8+T细胞的作用倍受重视，iNKT的作用一直被忽视。近年发现iNKT可不依赖传统CD4+和CD8+ T细胞而在体内直接抑制HBV复制；且慢性HBV感染后iNKT功能的下降一定程度上导致了HBV不能被彻底清除；此时iNKT的功能下降可能与其表面负性共刺激分子PD-1和Tim3表达上调有关。本课题以慢性HBV感染者和HBV转基因小鼠为研究对象，对慢性HBV感染者体内iNKT数量、功能及表面PD-1和Tim3表达水平进行研究；我们应用α-Galcer共培养刺激72小时，iNKT细胞的数量是有所增加的，关于此处的不同，还需进一步验证。而且基于前期我们的研究和现阶段的实验表明：慢性乙型肝炎患者外周血中的iNKT细胞数量和健康体检者并无明显差别，这和有些研究报道亦有不同之处。我们大胆猜测慢性HBV感染者iNKT细胞本身存在免疫功能的下降（或缺陷），致使细胞因子IL-4、IFN-γ分泌比例下降，且很可能与负性调控因子PD-1和（或）Tim3表达上调、和（或）刺激性受体CD28下调有直接关系。.我们再尝试通过在体外阻断PD-1、TIM-3联合CD28信号途径，力证几者间的关系。研究结果揭示了PD-1和Tim3信号途径与慢性HBV感染后iNKT低反应性呈正相关的关系，而CD28则与其呈负相关关系；发现如能双向调节这些正负调节因子可能改变HBV慢性感染、疾病发生发展的过程、并且能够增强临床抗病毒治疗的作用；同时发现经临床抗病毒治疗之后，可以消除iNKT细胞的低反应性、原HBV感染者低下的细胞免疫功能可得到部分的恢复甚或重建。这为临床探索慢性乙型肝炎的免疫干预治疗策略奠定实验基础。