加减补阳还五汤对眼缺血综合征视网膜神经节细胞保护的分子机制实验研究

眼缺血综合征（OIS）是由颈内动脉狭窄造成眼前后节慢性缺血的综合征，因其对视力影响显著，不及时治疗预后差，研究有效的治疗药物意义重大。临床中我们观察加减补阳还五汤对OIS有良好的治疗作用，中医理论认为OIS属气虚血瘀类疾病，应用加减补阳还五汤中君药黄芪主补气，气行则血行，诸药合用，使气旺血行，瘀祛络通。但该方剂治疗OIS机制尚不清楚，有待进一步研究。我们提出加减补阳还五汤可能通过增加VEGF的表达，抑制caspase-3及凋亡相关产物的过程，从而有效的保护视网膜神经节细胞（RGC），减少RGC凋亡的假说。为证实这一假说，我们将运用ERG，超声多普勒检测血流，OCT,免疫组化，TUNEL染色法，电镜检查，Westen-blot蛋白电泳RT-PCR等方法进行实验研究。目的为探讨该方剂治疗OIS的作用机制，为开发治疗OIS的中药提供理论基础。

眼缺血综合征（ocular ischemic syndrome，OIS）是由于颈动脉阻塞或狭窄所致的脑和眼的供血不足而产生的一系列脑和眼的症状。因其对视力影响显著，如不及时治疗则预后较差，因此研究有效药物治疗意义重大。眼缺血综合征的治疗原则是改善视网膜血液循环和保护视网膜神经节细胞存活，鉴于目前西药治疗眼缺血综合征的副作用较多及其种类的局限性，对更有特点的能够改善眼部供血的中药治疗的研究与开发显得尤为重要。临床中我们观察加减补阳还五汤对OIS有良好的治疗作用，且有研究发现，补阳还五汤具有抗神经元细胞凋亡的作用，其抗凋亡的机制与调控Bcl-2、Bax等凋亡相关基因密切相关，但该方剂治疗OIS的机制尚不清楚，目前尚无有关补阳还五汤对治疗OIS作用机制的深入实验研究。因此，本项目通过针控线栓法结扎大鼠双侧颈总动脉模拟眼缺血综合征的病因成功建立眼缺血综合征的大鼠模型以及体外诱导缺氧视网膜神经节细胞模型，分组给药观察药物干预作用，通过活体功能检测、体内组织、体外细胞培养多方面共同研究，运用原位细胞凋亡检测技术、HE视网膜切片染色、Western-blot、Real-time PCR等实验技术，检测各组大鼠视网膜组织以及体外视网膜神经节细胞凋亡物质表达量的变化情况，分析补阳还五汤对在体缺血视网膜组织以及体外培养视网膜神经节细胞的影响，研究补阳还五汤对缺血大鼠视网膜病理生理的改善作用。通过检测各实验组大鼠视网膜组织以及体外细胞促凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8以及抗凋亡相关基因Bcl-2等表达的变化，提出加减补阳还五汤能够抑制缺血视网膜组织及视网膜神经节细胞促凋亡相关产物的过度表达，表明加减补阳还五汤能改善OIS模型大鼠视网膜的缺血状态，能够有效的保护视网膜神经节细胞，减少视网膜神经节细胞的凋亡，从其分子生物学机制的研究进一步揭示加减补阳还五汤治疗OIS的抗凋亡作用。本项目首次对加减补阳还五汤治疗OIS机制在活体、体内、体外全方位进行实验研究，通过其抑制反应性凋亡途径的激活来发挥其神经保护作用，开辟了该药对视网膜神经节细胞的保护作用中一条可能的新途径，为中医气血理论指导下补气活血疗法注入科学内涵，为研制、开发有效治疗OIS的中药提供理论支持。