基于Nano/ALISA技术的肠道病原菌快速检测研究

近年来，由肠道病原菌引起的食源性疾病爆发事件时有发生，这无疑已成为日.益严重的世界性公共卫生问题。而目前，不管是传统培养方法还是PCR 等快速检测方法都还.难以满足肠道病原菌的快速诊断和污染源的快速确定，需要寻找更好的方法。因此，结合我们的前期实验，我们将致力于研发一种新型的纳米检测技术-纳米材料适配体联合免疫吸附法(Nano/ALISA)对肠道病原菌进行快速检测，利用特异适配体捕获菌体，通过磁性颗粒进行分离富集，最后通过纳米材料为载体偶联多个生物分子进行信号放大，获得适用于高灵敏度检测"三明治"结构。本课题首次提出了以适配体、病原菌和纳米材料构成三明治结构用于特异性检测肠道病原菌的新型纳米检测方法，为病原菌的检测提供了一种新的思路；以Nano/ALISA 技术作为一种新型的多级信号放大手段，有望在仅需类似于ELISA 技术的操作和设备情况下实现快速、灵敏地检测各种物质。

由肠道病原菌引起的食源性疾病爆发事件时有发生，我们每个人都生活在这种危险中，这无疑已成为日益严重的世界性公共卫生问题。但目前肠道病原菌的实验室诊断仍以培养检出病原菌为主要依据，最快也要四到八天才能作出最终检验诊断。而近年来，国内外学者针对肠道病原菌的快速检测技术展开了大量研究工作，但仍面临需要专门技术人员操作、所用的试剂和仪器昂贵和结果假阳性高等诸多问题。所以，不管传统培养方法还是ELISA、PCR等快速检测方法都还难以满足肠道病原菌的快速诊断和污染源的快速确定，需要寻找更好的方法。. 鉴于此，本研究结合纳米技术，并对已有的主要肠道病原菌特异适配体序列进行优化设计，将优化后的适配体或抗体通过化学修饰或物理吸附到纳米金、磁性微粒或石墨烯表面，实现生物传感器的组装。利用适配体(或抗体)与肠道病原菌菌体表面脂多糖间的特异性结合和结合后引起生物传感器的颜色变化、吸光度改变或荧光值改变来定性或定量检测标本中的目标肠道病原菌，成功建立鼠伤寒沙门菌快速比色nano-ELAAS检测方法、鼠伤寒沙门菌快速比色nano-ALISA检测方法、肠出血性大肠埃希菌O157:H7快速比色nano-ALISA检测方法和肠出血性大肠埃希菌O157:H7荧光检测方法。本研究研发的肠道病原菌快速检测纳米生物传感器，不需要特殊仪器，具有操作简便、检测时间短，灵敏度较高和特异性强等优点，在临床上用于检测肠道病原菌时既可实现快速检测、又可降低成本，从而为推广到临床提供了可能。仅需更换系统中的适配体或抗体就可以应用于其他病原菌的检测，在临床检验诊断，特别是病原菌检测中具有广阔的前景。本研究目前已发表相关论文6篇，其中SCI论文3篇，累计影响因子11.915分；已申请国家专利3项，都已进入实审阶段。