fgl2基因沉默治疗糖尿病心肌微血管病变及分子机制的实验研究。

前期研究初步提示fgl2为促炎症因子且反义fgl2基因促进Matrigel上条索状微血管结构的形成。心肌微血管病变是2型糖尿病早期主要病理改变，表现为血管新生和微循环障碍，与炎症、凋亡、凝血等病理生理过程密切相关。基于前期工作及已有研究，推测fgl2沉默促进血管新生，且改善微循环障碍，是用于治疗糖尿病心肌微血管病及由此引起的缺血性心脏病和心力衰竭的理想靶点。本项目利用糖尿病大鼠模型和心肌微血管内皮细胞,构建靶向fgl2的shRNA腺相关病毒，特异性沈默fgl2基因，明确以fgl2为靶点治疗糖尿病心肌微血管病变的作用及其分子机制，为糖尿病心肌微血管病变尤其是糖尿病合并心血管疾病的防治提供新的思路。

本项目利用糖尿病大鼠模型和心肌微血管内皮细胞,构建靶向fgl2的shRNA腺相关病毒，特异性沈默fgl2基因。转染MMVECs 96小时后，qRT-PCR、western blot等方法检测fgl2、Ang1、Ang2、Tie2、AKT2、bcl2、cox-2、bax等的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。发现转染fgl2shRNA慢病毒载体后MMVECs的fgl2表达水平明显下调，Ang1、Ang2、Tie2、AKT2明显上调；fgl2shRNA慢病毒转染MMVECs，MMVECs的增殖能力与迁移能力增强,可能通过上调Ang1和Ang2的表达来促进血管生成。转染fgl2RNAi慢病毒后的MMVECs中fgl2在RNA及蛋白水平表达明显下调，在RNA水平Bcl-2表达明显上调，Cox-2、Bax表达水平明显下调；MMVECs沉默fgl2后，细胞的增殖能力增强，凋亡减少，其机制可能是：沉默fgl2基因后，通过上调抗凋亡因子Bcl-2并下调促凋亡因子Bax的表达，并抑制促炎因子Cox-2的表达，从而抑制细胞凋亡，因此通过RNA干扰fgl2基因可以为抗细胞凋亡治疗提供新的靶点。同时我们干预糖尿病心肌病大鼠动物模型，发现心功能明显改善，并初步研究了其机制，为进一步研究奠定基础。