羟基氯喹抑制低甲基化DNA活化浆细胞样树突状细胞的机制研究

系统性红斑狼疮(SLE)是严重自身免疫病，T细胞和免疫复合物(ICs)存在低甲基化DNA，能活化浆细胞样树突状细胞(PDC)。羟基氯喹(HCQ)运用广泛，能抑制PDC活化。申请者建立了甲基化检测技术，观察到HCQ下调CpG-ODN诱导的TLR9/MyD88mRNA表达。推测HCQ影响DNA甲基化及其对PDC的活化。本研究从体内和体外探讨HCQ对DNA甲基化和低甲基化DNA活化PDC的影响。通过检测DNA甲基化，PDC上CD32、CD40、CD86、BDCA2和BDCA4表达， TLR9、MyD88、DNMT1和DNMT3a/3bmRNA表达，IFNα和IL-6水平，观察HCQ治疗对DNA甲基化和PDC影响。磁珠分选并以ICs和CpG-ODN活化PDC和单核细胞来源DC(MoDC)，加入HCQ，观察HCQ对细胞活化的影响。激光共聚焦检测溶酶体内pH，观察HCQ对PDC溶酶体内pH影响。

系统性红斑狼疮(SLE)是严重自身免疫病，T细胞和免疫复合物存在低甲基化DNA，能活化浆细胞样树突状细胞(pDC)。羟氯喹(HCQ)运用广泛，能抑制pDC活化。前期申请者观察到HCQ下调CpG-ODN诱导的TLR9/MyD88mRNA表达。推测HCQ影响DNA甲基化及其对pDC的活化。本研究从体内和体外探讨HCQ对DNA甲基化和低甲基化DNA活化pDC的影响。.结果显示：SLE特别是活动患者pDC水平降低（P<0.05），有关节炎、蛋白尿或白细胞减低SLE患者pDC水平显著降低（P<0.05），pDC水平与蛋白尿显著负相关（r=-0.359，P<0.05）。.未治疗SLE患者pDC水平低于正常对照（P<0.001），HCQ组pDC水平高于其他治疗组（P<0.01）；未治疗组SLE pDC表面CD32、CD86、CXCR4、BDCA4水平高于正常对照（P<0.05），HCQ组pDC表面CD32、CXCR4表达水平降低（P<0.05）。.SLE患者PBMC基因组DNA甲基化和DNMT1 mRNA表达水平低于正常对照（P<0.01），DNMT3B mRNA表达水平高于正常对照（P<0.01），活动与稳定组之间无差异。HCQ组DNA甲基化水平降低（P<0.05）。DNMT1 mRNA表达与DNA甲基化正相关（r=0.232，P<0.05）。.SLE患者血清IFN-α、IL-6水平高于正常对照（P<0.05），其中活动组IFN-α水平高于稳定组（P<0.05）；未治疗SLE患者IFN-α水平高于正常对照（P<0.05），强的松组和HCQ组IFN-α水平均低于未治疗组（P<0.05）。 .健康人PBMC体外培养中CpG+HCQ组TLR-9和MyD88 mRNA表达水平低于CpG组 (P<0.05)。pDCs加入CpG和CpG+HCQ体外培养，CpG组BDCA-2水平和MFI低于对照(P<0.05)，CD32和CD86水平和MFI及培养上清IFN-α浓度高于对照(P<0.05)。CpG+HCQ组CD32水平和MFI及培养上清IFN-α浓度均低于CpG组(P<0.05)。.健康对照pDC体外培养中，HCQ升高pDC细胞溶酶体pH值。.总之，HCQ抑制pDC表面CD32和CXCR4表达，升高溶酶体内pH值，抑制pDC的活化和趋化，减少pDC对靶器官的损伤。