对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸对仔猪免疫应激性炎症的协同抑制作用及其调控机制

仔猪免疫应激是炎性细胞因子和炎性介质过量分泌引起的仔猪全身炎症性疾病，其病理过程中的过度炎性反应是通过TLR-NF-κB信号通路所调控，抑制炎性细胞因子和炎性介质的过量产生是缓解仔猪免疫应激性炎症的关键措施。基于免疫应激性炎症的病理机制特点，项目提出联用对乙酰氨基酚和乙酰半胱氨酸协同抑制仔猪免疫应激性炎症的设想，将炎症调控靶点从传统的环氧化酶COX-2扩大到NF-κB、COX-2和iNOS，以期更全面评价两药的抗炎效果。在前期已完成的体外抑制脂多糖诱导单核巨噬细胞释放炎性细胞因子的基础上，拟进一步研究对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸后对脂多糖诱导仔猪单核巨噬细胞合成和分泌IL-1、IL -6、TNF-α、PGE2和NO的影响，观察NF-kB、COX-2和iNOS的蛋白和mRNA的表达变化情况，以期明确对乙酰氨基酚与乙酰半胱氨酸联合用药对缓解仔猪免疫应激性炎症的协同效应，并阐明其调控的分子机制。

仔猪免疫应激性炎症的病理过程受TLR4-NF-κB、JNK和炎性小体等信号通路所调控。⑴本项目主要研究了对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导后仔猪单核细胞TLR4-NF-κB信号通路的影响。体外试验结果表明，对乙酰氨基酚（0.5-1.0mM）和乙酰半胱氨酸（0.5-1.0mM）联用后对脂多糖诱导的致炎细胞因子（IL-1β、TNF-α和IL-6）和抗炎细胞因子（IL-10）的mRNA表达具有协同抑制作用，在0.125-1.0mM和0.0625-1.0mM范围内对单核细胞过量表达细胞因子和释放炎性介质（PGE2）具有协同抑制作用，对乙酰氨基酚（0.25mM）和乙酰半胱氨酸（0.5mM）能显著抑制NF-κB的活化。体内试验表明，与脂多糖造模组比较，脂多糖造模+对乙酰氨基酚（混饲600mg/kg）组仔猪血浆中IL-6水平在3h时显著降低，IL-10水平在24h时显著降低；脂多糖造模+乙酰半胱氨酸（混饲1200mg/kg）组在3h时血浆中4种细胞因子(TNF-α, IL-1β, IL-6 和 IL-10)水平均显著降低，24h时IL-10水平显著降低；脂多糖造模+对乙酰氨基酚组+乙酰半胱氨酸组在3h时血浆中4种细胞因子水平显著降低，24h时IL-10水平显著降低；对乙酰氨基酚和乙酰半胱氨酸联用后的对NF-κB的活化抑制作用达显著水平。⑵本项目还研究了对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导后仔猪单核细胞的JNK和炎性小体信号通路的影响。对乙酰氨基酚（0.5-1.0 mM）联合乙酰半胱氨酸（0.5-1.0 mM）对脂多糖诱导后仔猪单核细胞JNK信号通路的信号分子（JNK和caspase-3）的活化、细胞凋亡基因（BAX和FASL）与抗凋亡基因（BCL-X）的mRNA表达具有协同作用；对乙酰氨基酚（0.25-1.0mM）和乙酰半胱氨酸（0.25-1.0mM）联用后对脂多糖诱导的炎性小体信号通路的关键分子caspase-1活化有显著的抑制作用，0.5mM联用的抑制效果显著强于单用对乙酰氨基酚或乙酰半胱氨酸，对脂多糖诱导的IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达有协同抑制作用；在治疗剂量下乙酰半胱氨酸不影响对乙酰氨基酚的药动学特征。结论为，对乙酰氨基酚与乙酰半胱氨酸联用对仔猪免疫应激性炎症存在协同效应和多靶点机制。