额尔敦-乌日勒预处理对心肌缺血再灌注损伤的作用及其复杂机制研究

Eerdun-Wurile is the traditional Mongolian medicine to treat the diseases of the circulation system or the nervous system. So it mainly used to treat the cardiovascular and cerebrovascular diseases clinically. Eerdun-Wurile has been called "wonder drugs" because of its remarkable curative effect. We want to further clarify the treatment and mechanism of Eerdun-Wurile. This research project is building the Myocardial ischemia reperfusion injury(MIRI) rats model to observe the pretreatment effects of Eerdun-Wurile on MIRI for the first time, and to clarify the protective effects of Eerdun-Wurile on MIRI. We detect the correlation factor from the following aspects such as anti-oxidative stress, Anti-apoptosis, regulation effect and so on by adopting the technology of ELISA, Western blot, Real-time PCR, etc. In addition, we research whether Eerdun-Wurile cure disease by regulating the PI3K/Akt/mTOR pathway. Expected results: This experiment may clarify the mechanism of Eerdun-Wurile curing MIRI from the tissue, cellular, molecular level, excavate the superiority of multilevel, multi-way, multi-target of Compound Mongolian Medicine, and provide experimental basis for clinical medicine. This study can open up new approaches to develop new drugs for preventing and alleviating MIRI, and contribute to the development of national regions

额尔敦-乌日勒是治疗“黑、白脉病”的传统蒙药，临床主要用于治疗心脑血管病证，因其疗效卓著，具有“神药”之称。为进一步明确其主治范围及其作用机制，本项目首次通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型，观察额尔敦-乌日勒预处理对MIRI的影响，旨在明确额尔敦-乌日勒对MIRI的保护作用，同时采用ELISA、Western blot、Real-time PCR等技术方法从抗氧化应激、抗细胞凋亡、调控自噬等方面对相关因子进行检测，并探究其是否通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路而发挥作用。预期结果：有望从组织、细胞、分子水平阐明额尔敦-乌日勒干预MIRI的作用机制，发掘复方蒙药多层次、多途径、多靶点的作用优势，为临床提供实验依据。此研究将为预防和减轻MIRI新药的研发开辟新途径，为民族地区的发展做贡献。

额尔敦-乌日勒是治疗“黑、白脉病”的传统蒙药，临床主要用于治疗心脑血管病证。本项目首次通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型，观察了传统蒙药额尔敦-乌日勒预处理对MIRI的影响，同时采用多种技术方法从抗氧化应激、抗细胞凋亡、调控自噬等方面对相关因子进行检测，并探究其是否通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路而发挥作用，为临床应用提供实验依据。. 研究结果显示：采用额尔敦-乌日勒预处理对大鼠MIRI具有保护作用。额尔敦-乌日勒能够缩小MIRI大鼠心肌梗死面积（P＜0.05），降低因心肌损伤导致的血清中CK、LDH、AST的含量异常升高（P均<0.01），表明额尔敦-乌日勒具有抗心肌缺血再灌注损伤的作用。额尔敦-乌日勒能够明显增加MIRI大鼠心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT及T-AOC水平（P均<0.01），增加大鼠心肌组织NOS、NO的含量（P均<0.01），降低MDA 含量（P<0.01），对大鼠心肌缺血再灌注损伤氧化应激具有抑制作用，其机制可能为额尔敦-乌日勒可以改善抗氧化酶活性，提高氧自由基清除能力，抑制氧自由基产生，通过提高抗氧化能力对大鼠MIRI起到保护作用。额尔敦-乌日勒通过降低血中TNF-α、IL-6、IL-1β含量( P＜0. 01)，降低MIRI大鼠心肌组织TNF-α、IL-6、IL-1β及MMP2、MMP9的mRNA表达量( P＜0.05)，达到调控炎症反应的作用，可对MIRI起到保护作用。 额尔敦-乌日勒可通过抑制心肌细胞凋亡（p＜0.01）对大鼠MIRI起到保护作用，其抗心肌细胞凋亡的机制可能与通过上调Bcl-2表达，下调Bax，减少caspase3的表达，提高Bcl-2/Bax比值有关。额尔敦-乌日勒能降低MIRI大鼠心肌LC3-II及Beclin1的表达量和LC3-II/LC3-I的比值（P<0.05），升高p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR的比值（P均<0.05），表明额尔敦-乌日勒可减轻大鼠MIRI的程度，可能与其下调自噬相关蛋白LC3-II及Beclin1的表达，激活PI3K-Akt-mTOR信号通路有关。. 总之，本项目明确了额尔敦-乌日勒对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，可通过抗氧化应激、抗炎、抗细胞凋亡、调控自噬以及调控PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。