下丘脑PcG蛋白关键基因启动子区甲基化在联结孕期双酚A暴露与女童青春期发育提前中的作用

Although bisphenol A (BPA) exposure during pregnancy has been confirmed to cause premature puberty in female rat offspring, the mechanism remains unclear. In this project, to establish the evaluation system, pregnant female rats will be exposed to different doses of BPA at different pregnancy stages, and female offspring will be examined for premature puberty, serum hormone level (Kisspeptin-10、GnRH、LH、FSH、E2) as well as mRNA quantification and promoter methylation of hypothalamus PcG key genes Ezh2 and Eed. To explore the susceptible window and dose-dependent effect of BPA exposure, we will focus on verifying the role of hypothalamus PcG gene promoter methylation in BPA exposure during pregnancy and premature puberty of female offspring. The ultimate goal of this project is to lay the theoretical foundation for understanding the mechanism of BPA exposure impact on girl’s puberty development.

孕期双酚A暴露致子代雌鼠青春期发育提前已得到证实，但其作用机制也仍不清楚。本课题拟通过建立不同孕期、不同剂量双酚A暴露孕鼠模型，观察子代雌鼠青春期发育提前率，检测相关激素指标（Kisspeptin-10、GnRH、LH、FSH、E2），检测下丘脑PcG蛋白关键基因Ezh2和Eed mRNA表达水平和启动子区甲基化程度，探讨孕期双酚A暴露致子代雌鼠青春期发育提前的窗口期以及与相关激素指标的剂量反应关系，重点验证孕期双酚A暴露通过对子代下丘脑PcG蛋白关键基因启动子区甲基化作用导致雌鼠青春期发育提前的研究假设。本课题为最终阐明孕期双酚A暴露对女童青春期发育的影响及其作用机制提供理论依据。

双酚A（Bisphenol A，BPA）作为常见的环境内分泌干扰物，对人群的健康产生深远的影响，尤其孕期暴露对子代健康，特别是对子代青春期发育的影响更为引人关注，但至今孕期暴露导致子代青春期发育提前可能机制尚不明确。. 主要内容与结果：研究一，整个孕期母体不同剂量双酚A暴露对子代雌鼠青春期提前及调控青春期启动基因甲基化水平的影响。将40只受孕CD-1小鼠随机均分为对照组、低剂量组（8mg/kg）、中剂量组（40mg/kg）和高剂量组（200mg/kg）。于妊娠1天至妊娠18天，每日灌胃处理。结果显示：中、高剂量双酚A暴露组子代雌鼠比例低于低剂量组，双酚A暴露组子代雌鼠阴道开口时间和第一次动情时间均早于对照组，阴道开口率高与对照组。各剂量双酚A暴露组的子代雌鼠血清Kisspeptin-10与GnRH水平均高于对照组。各剂量双酚A暴露组子代雌鼠Eed1和Eed2的mRNA表达水平均低于对照组，8mg/kg和40mg/kg BPA暴露组Ezh2 mRNA表达水平相比对照组有所降低，而200mg/kg BPA暴露组Ezh2 mRNA有所增加。孕期母体双酚A暴露组子代雌鼠Eed1和Eed2甲基化水平均高于对照组。双酚A暴露组与对照组间Ezh1甲基化水平无明显变化。与对照组相比，孕期母体BPA暴露组Ezh2甲基化水平均明显增加。研究二，不同孕期母体BPA暴露对子代雌鼠青春期提前及青春期启动基因影响。将48只GD 0孕鼠随机分成3组（每组16只），每组再进一步随机分为BPA暴露组和对照组（每小组各8只）。孕早期组在GD 1-6，孕中期组在GD 7-12，孕晚期组在GD 13-18进行灌胃处理。结果显示：与对照组相比，孕中期8 mg/kg BPA母体暴露的子代雌鼠阴道开口时间较早、阴道开口提前率高于对照组。不同孕期母体低剂量BPA暴露对子代雌鼠Kisspeptin-10、HPG轴激素，以及对子代雌鼠Eed 和Ezh mRNA表达水平、Eed和Ezh 甲基化水平影响的实验数据即将完成。. 课题研究结果的科学意义：孕期母体双酚A暴露会影响青春期启动时间提前，并导致体内HPG轴功能的改变。相关机制研究证明，孕期双酚A暴露可能通过对子代下丘脑Eed、Ezh基因甲基化作用，影响了Eed、Ezh基因的表达，从而诱发青春期发育的启动。