miR-181在慢性淋巴细胞白血病肿瘤抑制通路中的作用研究

慢性淋巴细胞白血病(CLL)发病机制尚不清楚，研究发现，p53肿瘤抑制通路中p53基因功能异常及BCL-2家族蛋白高表达分别为CLL患者产生原发及继发耐药的主要原因，且其表达均可受microRNA(miR)调节。miR-181作为淋巴细胞发育过程中的关键调节分子，我们前期研究发现其表达在CLL显著下调，且在p53异常患者进一步减低，可能参与p53-BCL-2通路的调控。本项目拟①研究CLL中miR-181异常表达及是否存在甲基化对此的调控；②生物信息学方法筛选p53-BCL-2通路中与miR-181相作用的凋亡抑制基因，采用双荧光素酶报告系统确认；③p53-miR-181功能实验及染色质免疫沉淀验证p53是否可作为转录因子激活miR-181表达；④小分子RNA模拟天然 miR-181，体外细胞水平进行功能研究，观察其对CLL耐药的逆转情况。通过研究为难治耐药CLL提供新的药物干预靶点。

我们首先运用Agilent miRNA芯片筛选出一系列在慢性淋巴细胞白血病（CLL）及正常对照差异表达的miRNAs；运用RQ-PCR定量发现CLL患者miR-181a/b低表达与IGHV无突变、CD38阳性、p53缺失和/或突变均显著相关，且与CLL患者总体生存率(OS)及无治疗生存期(TFS)缩短均显著相关。. 生物信息学方法候选出可能受miR-181s调控，且在CLL显著高表达的抗凋亡基因；构建双荧光素酶报告基因载体，分别构建含有靶基因BCL-2、MCL-1、XIAP 3’UTR区的质粒，分别与miR-181a/b mimic、anti-miR-181a/b inhibitor、control mimic共转染耐药细胞株，进行荧光素酶实验鉴定miR-181a/b的靶分子。. 双荧光素酶报告实验显示miR-181a/b对BCL-2、MCL-1及XIAP均有显著抑制作用；western blot证实瞬时转染miR-181a/b模拟体后CLL原代细胞的BCL-2、MCL-1及XIAP蛋白表达较转染control组显著下调；40例CLL患者原代细胞，其中10例伴有p53基因缺失和/或突变，30例p53基因正常。流式凋亡检测显示在p53正常组，转染miR-34a、miR-181a、miR-181b mimics后均可显著增强CLL细胞对氟达拉滨的敏感性，而在p53缺陷组，转染各组miRNA后CLL细胞对氟达拉滨的敏感性无明显增加。. 本研究证实miR-181a/b在CLL发病机制中起到重要作用，可以作为CLL的预后指标，可能为CLL治疗提供新的靶点。. Dicer及 Drosha是成熟miRNA形成过程中的关键剪切酶，其异常表达可致miRNA表达的广泛失调。TIGAR（p53诱导糖酵解和凋亡调节因子）是p53调节线粒体呼吸的靶基因。我们发现Dicer、Drosha及TIGAR表达在CLL中具有预后意义且与p53状态相关。. 目前已发表SCI论著2篇及中文核心期刊综述一篇，培养博士研究生一名，已毕业。相关结果仍在进一步总结撰写。