成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）血清标志蛋白的分离、鉴定及临床诊断价值研究

LADA属于免疫介导性1型糖尿病的亚型，临床上常因其貌似2型糖尿病而被误诊，导致不能及时诊断并早期作针对性防治。目前LADA诊断主要靠检测胰岛细胞自身抗体，该指标敏感性有局限，也未反映细胞免疫反应在发病中的作用，导致部分LADA漏诊，因此有必要寻找新的诊断标志物以弥补单靠实验室抗体检测诊断LADA的不足。LADA在遗传和免疫反应方面的自身特点提示患者血清中可能存在特异蛋白标志物，我们在前期研究中应用SELDI-TOF-MS技术成功筛选LADA与初发2型糖尿病及正常人间5个血清差异蛋白作为诊断标志物，本项目中：我们用蛋白质组学技术，分离和鉴定已筛选的LADA血清蛋白标志物；对于缺乏市售特异性抗体的标志蛋白，设计、合成抗原肽，制备多克隆抗体；评估初步建立的ELISA检测血清标志蛋白鉴别诊断LADA与初发2型糖尿病的临床价值。本课题为以后诊断试剂盒开发等更深入研究奠定基础。

成人隐匿性自身免疫性糖尿病是一种缓慢进展的自身免疫性糖尿病，它以与糖尿病相关的自身抗体阳性为特征。此型糖尿病β细胞的自身免疫性破坏发生的速度较慢且发病人群年龄偏大（常大于30岁），因此患者早期血糖的增高有一个潜伏期。所以尽管在发病初期它与2型糖尿病很相似，但就治疗方法而言两者应当有所区别。目前在成人隐匿性自身免疫性糖尿病的诊断和鉴别诊断方面主要的方法是多种自身抗体及C肽的检测，但是二者均有一定的局限性。本研究利用同位素标记相对和绝对定量技术联合液相色谱串联质谱技术寻找成人隐匿性自身免疫性糖尿病的差异蛋白，随后通过文献资料及生物信息学检索对质谱结果进一步分析，筛选出有意义的生物标记物并用免疫印迹和酶联免疫反应对其进行验证，从而为临床早期诊断提供参考。最终本研究筛选出的三个蛋白（糖蛋白磷脂酶D、血浆激肽释放酶和C1酯酶抑制物），它们可能分别参与了炎症过程、先天免疫应答和补体激活过程以及断开GPI-锚蛋白连接产生肌醇磷酸多糖引起胰岛素改变或释放抗原抗体的过程，它们在血浆中的相对上调可能与成人隐匿性自身免疫性糖尿病密切关联，可能成为早期诊断该疾病的血浆候选生物标志物。