电针促肥大细胞趋经穴迁移、募集作用的机理研究

本项目基于以往大量实验研究已证明针刺可使穴位（区）组织内肥大细胞（mast cell,MC）数量增多和发生脱颗粒的事实和MC在针刺过程中所起的重要作用，以及MC通过迁移和募集活动在机体多种生理和病理反应过程中所起的重要作用，探索电针促使MC趋经穴迁移、募集引起MC数量增多的机理。由于细胞趋化因子是MC迁移的主要动力，故本研究拟采用抗体封闭技术、放射免疫和组织化学技术等，研究比较电针穴位所引起的MC数量变化与细胞趋化因子（干细胞因子、MCP-1、黏附因子-1、组织胺等）含量变化之间的相关规律。MC的迁移和募集反应对经络研究之所以重要，在于穴位组织内MC数量的明显增加，可引发MC脱颗粒率增加，其释放的多种生物活性物质可在局部组织引起级联或瀑布样反应，此种反应形式与循经感传现象密切相关。因而，研究MC循经穴迁移和募集等活动规律，对揭示针灸效应和经络实质具有重要意义。

目的：本项目采用抗体封闭、放免和组织化学等技术，研究了电针大鼠穴位所引起的MC趋穴区迁移和募集过程中，MC数量和脱颗粒率变化与不同细胞趋化因子(SCF、MCP-1、IMC-1)和组织胺等含量变化之间的相关性，以及MC与血管和神经等组织形成的接触联系。方法：分别采用干细胞因子（SCF）、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、黏附因子-1（IMC-1）抗体，以及色甘酸钠 (SCG)和Ca2+络合剂（EDTA）注射于各实验组大鼠胃腧和足三里穴，通过建立乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AchE）甲苯胺蓝双染色新技术，观察各组大鼠穴区组织肥大细胞（MC）数量和脱颗粒变化之差异，以及各组动物穴区组织MC与血管和神经等组织的接触联系；通过放射免疫技术检测各组穴位组织趋化因子SCF、MCP-1、ICAM-1的含量。结果：与对照组比较，电针足三里和胃腧穴后，MC趋穴区沿血管神经募集数量明显增多和脱颗粒率升高（P ＜0.05）。穴区分别注射Anti-SCF、Anti-MCP-1、Anti-ICAM-1的各组MC数和脱颗粒率均比对照组和电针组显著下降（P ＜0.05）。穴区组织SCF、MCP-1含量变化与MC数和脱颗粒率的变化有明显相关性（P ＜0.05），但组织中ICAM-1含量变化不显著。穴位注射SCG和EDTA组MC数和脱颗粒率均比对照组和电针组显著下降（P ＜0.05）。电针组穴区组织中血管内皮ICAM-1mRNA表达比对照组显著增多（P ＜0.05）。 正常组、电针组大鼠胃腧穴组织中的MC的Ki- 67 阳性表达不明显。通过染色技术创新，发现MC在穴区血管和神经等的组织间隙内通过迁移和募集活动与穴区组织血管和神经等组织发生接触联系，形成MC+血管+神经交互网络联系的动态功能结构。电针组穴区的MC+血管+神经交互网络联系的动态功能结构比其他实验组更加显而易见。结论 实验结果表明SCF、MCP-1、ICAM-1和Ca2+对MC趋穴区组织迁移、募集及脱颗粒有明显促进作用。另外，MC本身功能的稳定性对其数量和脱颗粒等变化也有一定影响。在电针促MC趋经穴组织迁移、募集形成明显的MC+血管+神经交互网络联系的动态功能结构，该结构是多结构相联系的复合网络系统，具有系统生物学特征，我们将其称之为“移动细胞通讯循经交互联系网络复合功能系统”，它是实现针刺效应的重要功能性结构