癌痛消方对大鼠肝癌模型细胞凋亡信号传导的调控研究

癌痛消方由膈下逐瘀汤加减而成，前期研究中证实其具有良好的治疗肝癌的临床疗效。本研究在前期研究基础上，基于基因组学研究方法，结合中医辨病论治及方证对应等理论，拟采用流式细胞术、免疫组化、RT-PCR等技术，进行癌痛消方及其拆方对移植性肝癌凋亡信号传导的调控研究及癌痛消方对大鼠诱发性肝癌影响的研究，观察移植性及诱发性肝癌大鼠各组肝癌/肝脏组织细胞形态学、线粒体膜电位、肝癌细胞Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas/FasL蛋白及其mRNA表达等，从而揭示肝癌细胞的凋亡规律，明确癌痛消方及其拆方治疗肝癌的体内效应物及作用途径、靶点，阐明不同治法的药物组合与肝癌细胞凋亡作用靶点的相关性，明确癌痛消方对大鼠诱发性肝癌的防治作用及细胞凋亡机制，为癌痛消方预防肝癌复发的疗效及机制提供实验依据，为抗肿瘤新药的研发提供前期基础，为中医药专病专方研究提供新的研究思路。

癌痛消方由膈下逐瘀汤加减而成，前期研究中证实其具有良好的治疗肝癌的临床疗效。本研究在前期研究基础上，基于基因组学研究方法，结合中医辨病论治及方证对应等理论，进行癌痛消方及其拆方对移植性肝癌凋亡信号传导的调控研究及癌痛消方对大鼠诱发性肝癌影响的研究。研究发现：（1）癌痛消方中清热解毒药物在促进肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞增殖等疗效最为显著，从短期疗效来看，该方中清热解毒药物的功用几乎等同于全方，因此作为君药，在肝癌治疗中起主要的治疗作用；（2）癌痛消方中活血化瘀药物可影响肝癌荷瘤机体血液流变学，改善微循环，从而减少癌栓的形成，提高剪切力，能一定程度上抑制肝癌细胞的生长和转移；同时，活血化瘀药物还能够显著降低MVD，有效抑制肿瘤新生血管形成；（3）癌痛消方能够显著影响肝癌细胞细胞凋亡信号传导调控因子，下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2、survivin的表达以及上调细胞凋亡促进因子Fas、FasL、Caspase-3的表达。其方中清热解毒药物作用最为显著； （4）癌痛消方可以预防二乙基亚硝胺诱发性肝癌的发生，诱癌后第十六周、十八周癌痛消方预防用药组肝癌的发生率均为50％、对照组均为100％。（5）癌痛消方干预诱癌大鼠，在不同时间段，可有不同的凋亡基因/蛋白和凋亡抑制基因/蛋白发挥作用。预防组促凋亡基因/蛋白casepase-3、Fas/ Fasl、Bax的表达升高；凋亡抑制基因/蛋白survivin，原癌基因/蛋白Bcl-2的表达被一定程度的抑制。癌痛消方可以调节肝癌细胞凋亡或促凋亡因子来发挥预防和治疗原发性肝癌。本课题进一步明确癌痛消方的预防和治疗原发性肝癌的作用以及机制，深入了解不同治法的作用机制，为癌痛消方预防和治疗肝癌提供实验依据，为抗肿瘤新药的研发提供良好的基础。