乏氧微环境下探讨癌痛消方干预肝癌血管生成拟态的机制研究

The effect of anti-angiogenesis therapy on the growth and metastasis of hepatocellular carcinoma（HCC） only targets endothelial cells is not desirable.Therefore, the research towards vasculogenic mimicry(VM) will be beneficial to improve the clinical curative effect of HCC. Extensive clinical practice and experimental studies confirmed that Ai Tong Xiao formula not only had curative effect on HCC,but also inhibited angiogenesis, and improved hypoxic microenvironment of HCC. So whether Ai Tong Xiao formula can inhibit the growth and transfer of HCC through intervening on vasculogenic mimicry(VM) and its related factors based on hypoxic microenvironment. This study adopts implanted hepatoma model established by Walker-256, which is intervened by Ai Tong Xiao formula. the VM of HCC tissue are detected by PAS and CD31 double staining.Meanwhile, CoCl2 induces HCC cell line HepG2 hypoxia in vitro cultured,then to observe hepatocellular carcinoma cell line HepG2 turned into tube ability, RT-PCR and Western-blot methods are used to detect HIF-1α、VEGF、EphA2、VE-cadherin. The purpose of this study is to explore the partial mechanism of Ai Tong Xiao formula treating primary liver cancer.

肝癌的生长及转移仅以内皮细胞为靶点的单纯抗血管生成治疗效果不佳，对血管生成拟态的研究将有利于提高肝癌的临床疗效。前期大量临床及实验研究证实癌痛消方治疗肝癌，疗效确切；且具有抑制肝癌血管生成拟态及改善缺氧微环境的作用。那么，乏氧微环境下癌痛消方干预肝癌血管生成拟态及其相关因子，是否是达到抑制肝癌细胞生长与转移作用的机制？本研究采用Walker-256 建立大鼠移植性肝癌模型，癌痛消方灌胃给药后，采用PAS与CD31 双重染色法观察各组大鼠肝癌组织中的血管生成拟态，同时体外二氯化钴诱导体外培养肝癌细胞株HepG2缺氧，观察肝癌细胞株HepG2的成管能力，RT-PCR及Western-blot 方法检测肿瘤HIF-1α、VEGF、EphA2、VE-cadherin mRNA及蛋白表达水平，由此探讨癌痛消方治疗原发性肝癌的部分疗效机制。

肝癌的生长及转移仅以内皮细胞为靶点的单纯抗血管生成治疗效果不佳，对血管生成拟态的研究将有利于提高肝癌的临床疗效。前期研究表明癌痛消方具有调节缺氧微环境，抑制肝癌血管新生的作用。本实验从乏氧微环境下干预肝癌血管生成拟态的角度研究癌痛消的抗癌机制，采用体内动物实验和体外细胞培养方法进行实验研究，研究发现：（1）体外细胞实验结果显示癌痛消方可通过降低VM形成相关因子HIF-1α、VEGF、EphA2、VE-cadherin蛋白表达，明显抑制肝癌细胞血管生成拟态的形成。表明癌痛消通过调控肝癌组织中HIF-1α、VEGF、EphA2、VE-cadherin的表达，抑制肿瘤血管生成微环境的变化。（2）动物实验结果显示癌痛消在乏氧微环境肝癌组织中HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EphA2mRNA、VE-cadherin mRNA的过表达均有调节作用，在乏氧微环境中高表达的HIF-1α、VEGF、EphA2、VE-cadherin基因均有不同程度的下调。研究结果提示癌痛消可以通过调节乏氧微环境中肝癌组织血管生成拟态相关因子HIF-1α、VEGF、EphA2、VE-cadherin的表达起到抗肿瘤血管生成拟态作用进而发挥防治肝癌的作用，本课题进一步明确癌痛消防治疗原发性肝癌的作用以及机制，为肝癌的中医药治疗提供新的研究思路及方法，为抗肿瘤新药的研发提供良好的基础。