KRT18通过与LRP16相互作用调控AR的功能活性及其在前列腺癌中的研究

LRP16是最近识别的一个雄激素上调的靶基因，同时也是雄激素受体(AR)的一个辅激活因子。抑制LRP16基因表达显著下调AR阳性前列腺癌LNCaP细胞对雄激素的增殖反应性。这些前期研究结果提示LRP16在前列腺癌发生与进展中的重要作用。近期我们通过酵母双杂交和GST-pulldown实验初步证实KRT18与LRP16之间的相互作用关系，由于KRT18是细胞浆分布的中间丝蛋白，上皮细胞分化标记，在上皮起源的肿瘤中表达往往下调，所以我们提出"KRT18可能通过相互作用方式将LRP16扣留在细胞浆中，从而灭活LRP16核功能"的假说，本项目将通过一系列分子与细胞学水平的研究对这一假说进行求证，研究KRT18/LRP16相互作用对雄激素反应性前列腺癌细胞增殖侵袭能力的影响，进而阐明KRT18/LRP16/AR分子调控轴在前列腺上皮分化中的生理学意义以及在前列腺癌组织标本中表达的临床病理学意义。

本研究中，我们通过GST pull-down验证了LRP16与核受体超家族成员ERβ、GR、PPARα、PPARγ的相互作用，提示LRP16至少还可与ERα以外的5个核受体家族成员相互作用； 进一步采用核受体荧光素酶报告基因转染细胞，通过检测荧光素酶活性证实LRP16可增强AR、GR、ERβ、PPARα、PPARγ的转录激活活性。本研究初步证实，macro domain 家族成员LRP16 可与多个核受体相互作用，并增强其转录激活活性，是核受体家族的共激活因子。随后通过免疫共沉淀及GST pull-down等体内、体外方法对对LRP16/ART-27的相互作用进行了验证。同时也验证了LRP16/KRT18的相互作用，并鉴定其作用的结构。进一步的研究显示KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆，是影响LRP16亚细胞分布的关键因子。过表达KRT-18可以阻断LRP16对AR转录活性及下游靶基因的调控作用。此外我们还发现LRP16是NF-kappaB的一个重要的核内调控因子。下一步我们将重点阐述LRP16在肿瘤诊断中的应用价值。