Notch信号通路在分泌性中耳炎CD4+T细胞分化中的作用机制研究

The immune response is one of the important pathogenic factors of otitis media with effusion (OME), which plays an important role in the pathogenesis and chronic persistent healing of OME. Our previous preliminary work has confirmed that CD4+T cells are involved in the development of OME, and expression of its related subgroups in OME change and show disproportion. However, it is still unclear that why this phenomenon happens and what its pathway is. By our previous study on OME rate model, we found that the expression of the Notch signaling pathway changed, which was confirmed to be involved in the differentiation of CD4+T cells in a variety of immune-related diseases. Therefore, we hypothesized that the differentiation of CD4+T cells in OME is regulated by Notch signaling pathway. The aim of the research is to study the changes of Notch signaling pathway in OME rats by the RNA interference, and to observe its effect on the differentiation of CD4+T cells, and then to find new target and method for the treatment of OME.

免疫反应是分泌性中耳炎（otitis media with effusion，OME）的重要致病因素之一，在OME的发病及慢性迁延不愈中发挥了重要作用。我们前期工作已经证实CD4+T细胞参与了OME的发生发展，且其相关亚群在OME中的表达发生变化并存在细胞失衡，但是为什么会出现这种现象及通过何种途径仍不清楚。我们前期对OME大鼠模型进行研究，发现Notch信号通路的表达发生变化，且此通路已在多种免疫相关疾病的研究中证实参与CD4+T细胞的分化。因此我们提出假设：OME中CD4+T细胞各亚群的分化受Notch信号通路的调控。本课题组通过RNA干扰技术来研究OME大鼠中Notch信号通路的变化，以观察其对CD4+T细胞分化的影响，对阐明OME的免疫学发病机制具有重要意义，为OME的治疗寻找新靶点及新方法。

摘要：免疫反应是分泌性中耳炎（otitis media with effusion，OME）的重要发病机制之一，在OME的发病及慢性迁延不愈中发挥了重要作用。我们前期工作已经证实CD4+T细胞参与了OME的发生发展，且其相关亚群在OME中的表达发生变化并存在细胞失衡；此外，在对OME大鼠模型进行研究中发现，与CD4+T细胞密切相关的Notch信号通路的表达发生变化。因此我们提出假设：OME中CD4+T细胞各亚群的分化受Notch信号通路的调控。本课题组通过观察OME大鼠中多个Notch信号通路的变化，同时采用RNA干扰技术并观察干预后OME大鼠中CD4+T细胞分化的变化，来研究Notch信号通路在OME大鼠CD4+T细胞分化中发挥的作用，对阐明OME的免疫学发病机制具有重要意义，为OME的治疗寻找新靶点及新方法。在三年的研究中，我们应用卵清蛋白对SD大鼠进行全身致敏及耳内局部激发，建立OME模型，然后腹腔注射不同剂量的γ-分泌酶抑制剂（DAPT）阻断Notch信号通路；通过组织形态学，包括中耳切片苏木精-伊红染色（HE）、阿利新蓝-过碘酸雪夫染色（AB-PAS）、扫描电镜（SEM）和组织铺片免疫荧光染色（IF）等评估OME模型、阻断Notch信号通路后中耳病理学变化和Notch信号通路配体Jagged1在中耳的表达；并应用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）技术评估中耳Th1型细胞因子（IFN-γ）和Th2型细胞因子（IL-4，IL-5）、关键转录因子（T-bet，GATA-3），以及Notch信号通路配体Jagged1和下游靶基因Hes1的表达水平。实验结果发现：卵清蛋白诱导的OME存在Th1/Th2细胞模式失衡，认为该造模方法可以用来研究变态反应与OME之间的关系；DAPT阻断Notch信号通路后，可以抑制Th2型免疫细胞分化，调节Th1/Th2细胞模式失衡，进而有效缓解OME中耳腔局部炎性病变。由此我们推断，DAPT可能是治疗与免疫反应相关的OME的一个靶点，为OME的深入研究提供了一定的理论依据。