Notch信号通路在脂肪源性诱导干细胞成骨分化中的研究

Bone regeneration is an important problem of tissue engineering and regenerative medicine. Seeding cell is one of the core factor of bone regeneration. Induced pluripotent cells (iPS) is a great progress in the field of stem cells and tissue engineering. This project will start two aspects works, first we will build the adipose derived induced pluripotent cells (ASCs-iPS) by transfecting Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 genes into adipose stem cells, then we will study the characters of the ASCs-iPS, including proliferation, protein expression, methylation, three mesoderm differentiation, karyotype analysis, embryoid body, tetraploid compensation et al. Then we will study the relationship between Notch signal and osteogenic differentiation of ASCs-iPS. Based on these work, we will apply the osteogenic differentiated ASCs-iPS into bone regeneration to build ectopic and in-situ bone. This project will try to accumulate the experience and data of adipose derived induced pluripotent stem cell and bone tissue engineering.

再生医学的一个重要研究方向就是将干细胞诱导分化为成骨细胞系，用于骨组织工程和外科修复重建。诱导干细胞技术避免了免疫排斥和伦理道德问题，是生命科学领域的一次巨大革命。本研究拟从两个方面入手，首先获取小鼠脂肪源性诱导干细胞，深入研究其各种细胞生物学特性，包括增殖、分化、蛋白特性、甲基化水平、多胚层分化能力、细胞核型分析、拟胚体形成能力、构建四倍体嵌合小鼠等,进而研究Notch信号通路在脂肪源性诱导干细胞成骨分化中的调控作用；在此基础上，结合组织工程与再生医学的方法，合成适当的生物支架材料，构建组织工程骨，实现异位及原位的骨再生，为骨缺损的修复与再生寻找新的治疗方法和途径，为诱导干细胞在组织工程的应用积累经验与数据。

【项目背景】. 再生医学的一个重要研究方向就是将干细胞诱导分化为成骨细胞系，用于骨组织工程和外科修复重建。诱导干细胞技术避免了免疫排斥和伦理道德问题，是生命科学领域的一次巨大革命。Notch信号通路是一种高度保守的细胞间信号传导机制。该信号通路对细胞的增殖、分化与凋亡，及器官的形成、发育都起着重要的调控作用。本研究拟从两个方面入手，首先获取小鼠脂肪源性诱导干细胞，深入研究其各种细胞生物学特性，包括增殖、分化、蛋白特性、甲基化水平、多胚层分化能力、细胞核型分析、拟胚体形成能力、构建四倍体嵌合小鼠等,进而研究Notch信号通路在脂肪源性诱导干细胞成骨分化中的调控作用。.【主要研究内容】.1.脂肪源性诱导干细胞的构建：包括Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4质粒的构建、基因转染、诱导干细胞克隆的筛选等；.2.脂肪源性诱导干细胞的鉴定：包括诱导干细胞形态学、增殖、蛋白表达特性、多胚层分化能力、细胞核型分析、拟胚体形成能力、构建四倍体嵌合小鼠等；.3.Notch信号通路对脂肪源性诱导干细胞增殖、分化能力的调控.4.构建基于脂肪源性诱导干细胞的组织工程化骨：包括生物支架材料制备、细胞复合、动物实验等。.【重要结果及科学意义】.1.成功构建脂肪源性诱导干细胞并进行鉴定；包括诱导干细胞形态学、增殖、蛋白表达特性、多胚层分化能力、细胞核型分析、拟胚体形成能力；成功构建脂肪源性诱导干细胞来源的四倍体嵌合小鼠等；证实脂肪源行诱导干细胞的全能性；研究成果发表在Cell Proliferation, Curr Stem Cell Res Ther等杂志上。.2.成功研究Notch信号通路对脂肪源性诱导干细胞增殖、分化能力的调控；成功构建基于脂肪源性诱导干细胞的组织工程化骨：包括生物支架材料制备、细胞复合、动物实验等。相关成果发表于Bone Research, International Journal of Oral Science, Curr Drug Metab等杂志。.3.共发表标注本基金资助的第一及通讯作者SCI论著11篇，其中影响因子3以上4篇，另外还有3篇标注本基金号资助的通讯作者SCI论文被接收，将于2016年正式发表。主编英文专著1部。