红霉素生物合成基因调控的研究

红霉素及其衍生物是临床上重要的抗炎药物，近年来对红霉素生物合成的分子机制已非常清晰，以红霉素生物合成基因为基础的组合生物合成已经合成了100多种红霉素衍生物，但至今国内外尚没有对红霉素生物合成基因调控的报道。本项目以淡青紫链霉菌为宿主菌，构建红霉素生物合成正调节基因筛选系统，直接从糖多孢红霉菌基因文库中筛选包含红霉素生物合成正调节基因的DNA片段，对克隆序列测定和分子生物学软件分析，与数据库比较推测红霉素合成正调节基因ORF。将糖多孢红霉菌染色体上相应的调节基因失活，用HPLC对突变体发酵产物中红霉素进行分析，判断该基因是否为调控基因，再用基因互补加以确认。调控基因在大肠杆菌中超量表达后，进行DNA结合试验和DNaseI足迹分析，以确定该调控蛋白与红霉素合成基因调控作用位点。本项目对认识红霉素生物合成基因调控机制，应用基因工程提高红霉素生物合成产量和指导红霉素基因工程研究具有重要意义。