化痰祛瘀息风法对幼龄癫痫大鼠血脑屏障通透性及相关蛋白表达影响的研究

Epilepsy is a nervous system disease of serious harm to human health. The incidence of epilepsy in children is about 10 times that of adults. The method of resolving phlegm、removing stasis and calming wind is effective,the advantage of low toxicity and side effects in the treatment of epilepsy in children.But the mechanism of action is not clear about the method.For example, whether the active ingredient of the method through the blood-brain barrier(BBB) in neurons,how to affect the function of the BBB. On the basis of pre-clinical and experimental studies,through observing the BBB ultrastructure,permeability changes,and related proteins (MMP-9, ICAM-1, AQP-4, Cx43) expression in young epileptic rats, we will explore the impact of the method of resolving phlegm、removing stasis and calming wind on the BBB permeability and function in young epileptic rat, Investigating the relationship of the BBB and epilepsy, Clarifying the mechanism of action of this method antiepileptic.These study will help us to apply the method reasonablely,to improve the clinical efficacy in the prevention and treatment of pediatric epilepsy.

癫痫是一种严重危害人类健康的疾病，且儿童癫痫的发病率约为成人的10倍。中医药化痰祛瘀息风法治疗儿童癫痫具有有效、低毒副作用的优势，然而制约进一步稳定提高疗效的瓶颈在于化痰祛瘀息风法治疗癫痫的取效机制不明确，如化痰祛瘀息风法用药的活性成分能否通过血脑屏障作用于神经元，如何影响血脑屏障的功能等。本项目在前期临床和实验研究的基础上，通过观察幼龄癫痫大鼠血脑屏障超微结构、通透性的改变以及相关蛋白（MMP-9、ICAM-1、AQP-4、Cx43）的表达，探讨化痰祛瘀息风法对癫痫大鼠血脑屏障通透性及相关蛋白表达的影响，血脑屏障的破坏与癫痫发生发作的相关性，阐明化痰祛瘀息风法抗癫痫的作用机制和特点，以期指导临床，合理应用化痰祛瘀息风法防治小儿癫痫，稳定提高临床疗效。

癫痫是儿科常见的神经系统疾病，风、痰、瘀是癫痫的关键病因，化痰、祛瘀、息风为癫痫的主要治疗原则，以化痰祛瘀息风立法的方药平痫冲剂在临床中治疗癫痫效果良好。然而，其药效机制尚不明确。目前研究发现，血脑屏障结构与功能的异常在癫痫发病中起重要作用。本研究拟通过建立癫痫大鼠模型，运用透射电镜、酶标仪及免疫组织化学法，来观察用药前后癫痫大鼠血脑屏障的超微结构、通透性变化以及相关的蛋白表达，旨在探讨血脑屏障与癫痫发生的相关性，并进一步阐明化痰祛瘀息风法用药的药效机制是否与干预血脑屏障的通透性、调节血脑屏障的功能及调控血脑屏障的相关蛋白表达有关。通过研究发现，化痰祛瘀息风法用药可有效控制癫痫发作，可明显改善血脑屏障通透性，可较好修复血脑屏障超微结构的病理状态，可显著下调血脑屏障相关的蛋白表达。具体如下：经用药后，息风组、化痰组、平痫冲剂及西药组的血脑屏障超微结构恢复趋向正常结构，其中平痫冲剂组与西药组作用较为明显；祛瘀组超微结构无明显变化。经用药后，EB推注染色后测定癫痫大鼠血脑屏障通透性，各组存在差异。以息风组、化痰组、平痫冲剂及西药组较为明显（P＜0.05），其中平痫冲剂组及西药组下降尤为显著（P＜0.05），祛瘀组无明显差异（P＞0.05）。HE染色观察癫痫大鼠脑组织形态，与模型组相比较，随着用药干预时间延长，息风组、化痰组、平痫冲剂及西药组椎体神经元形态逐渐恢复正常，核固缩消失，染色趋于正常。其中尤以西药组与平痫冲剂组较为明显；祛瘀组未见明显变化。免疫组化法检测癫痫大鼠血脑屏障相关蛋白MMP-9、 ICAM-1、 AQP-4、 Cx43 的表达，随着用药时间的延长，上述蛋白阳性表达在息风组、化痰组、平痫冲剂及西药组均有不同程度的下调，其中以平痫冲剂组及西药组下调为显著，祛瘀组无明显变化。通过研究发现，血脑屏障与癫痫的发生密切相关，化痰祛瘀息风法用药有较好的抗痫作用，可能与干预血脑屏障的结构与功能有关。