DC靶向性纳米微粒修饰TSHR-A联合雷帕霉素诱导Graves病小鼠免疫耐受的研究

Specific immune tolerance is a research hotspot in treatment of Graves's disease. A critical step is to induce antigen-specific tolerogenic dendritic cell (DC) in vivo. Therefore, an induction method targeting DC in vivo could improve the effectiveness and precision of treatment. In preliminary studies, we stimulated splenocytes with TSHR-α peptide and rapamycin loaded DC-targeting PLGA nanoparticles; and induced TSHR-α antigen-specific tolerogenic DC, which provide a feasible solution for induction of specific immune tolerance in vivo. However, it is still unknown about the curative effect of this method in vivo. Therefore, we will interfere Graves’ disease mice with this induction method, at different stages of onset; and study the influences of this method on differentiation of tolerogenic DC, proliferation of specific regulatory T cells, formation of TSHR-α specific immune tolerance and the effects of exosomes derived from tolerogenic DC, as well as thyroid function, autoantibody and monocyte infiltration of thyroid tissue, fibrosis of ocular muscle, in order to explicit the effects of TSHR-α mediated specific immune tolerance on preventing and treating Graves’ disease and ophthalmopathy, avoiding systemic immune disorder, furthermore, to provide a new idea for treatment of Graves’ disease.

特异性免疫耐受是Graves病治疗的研究热点。体内诱导抗原特异性耐受型树突状细胞（DC）是免疫耐受形成的关键步骤。故而，采用靶向性针对DC的体内诱导方式，可提高治疗的有效性和精准性。我们前期研究采用DC靶向性PLGA纳米微粒包载TSHR-A抗原和免疫耐受诱导剂—雷帕霉素的干预方式，在脾细胞中初步诱导出TSHR-A特异性耐受型DC，为进一步诱导特异性免疫耐受提供了可行方案；但该诱导方式的体内作用及其治疗Graves病的效果如何，尚不明确。为此，我们将运用该方式，在Graves病小鼠发病的不同阶段实施干预，评估耐受型DC分化、TSHR-A特异性Treg细胞增殖介导的免疫耐受形成，以及耐受型DC源性外泌体在其中的效能；观察甲状腺和眼外肌等相关病情变化。探讨该诱导方式在免疫预防、靶向治疗Graves病及其眼病、避免全身免疫紊乱等方面的免疫学机制和作用，为Graves病治疗提供精准医学方向的思路。

特异性免疫耐受是Graves病治疗的研究热点。体内诱导抗原特异性耐受型树突状细胞（DC）是免疫耐受形成的关键步骤。故而，采用靶向性针对DC的体内诱导方式，可提高治疗的有效性和精准性。本研究我们以复乳法，构建TSHR-A多肽为内水相、PLGARapa为油相、甘露糖为靶向性外水相的DC靶向性PLGARapa(TSHR-A)纳米微粒。检测纳米颗粒的理化特性以及稳定性等；并检测了其生物安全性和在小鼠体内的分布情况。 . 我们在体外培养了小鼠树突状细胞（DC），并检测了合成的纳米小球的有效和安全浓度。将DC和纳米小球共培养后发现DC能很好的摄取纳米小球。将不同组的纳米小球和DC细胞和小鼠脾细胞共培养，运用流式细胞仪和免疫荧光共聚焦显像，发现PLGARapa(TSHR-A)纳米微粒可降低抗原递呈过程中标志物MHC II和CD86的表达，脾细胞中CD25+ FoxP3+Treg细胞的表达率增加，诱导了T细胞的极化。. 我们运用含有TSHR-A片段的重组腺病毒诱导了小鼠Graves病模型。检测各组小鼠疾病进程中体内甲状腺功能、甲状腺自身抗体表达，甲状腺组织病理等的变化情况。发现造模前使用NP（TSHR-A+Rapa）干预可以降低Graves病的成模率。而对于已成模的Graves病小鼠，使用NP（TSHR-A+Rapa）治疗4周后可降低小鼠血清TRAb和T4水平，Western Blot检测小鼠脾细胞中MHC II、CD86标志物表达下降，血清细胞因子IL-4，IL-17表达降低，IL-10和TGF-β分泌增加，提示NP（TSHR-A+Rapa）可以抑制TSHR-A特异性抗原的递呈过程，减少辅助性T细胞的活化水平，可能诱导小鼠特异性免疫耐受的产生，和对照组相比，对于减轻Graves病免疫反应有一定的作用，为Graves病治疗提供精准医学方向的思路。