P2Y12受体激活抗血小板凋亡的机制研究

凋亡是调节细胞生命进程的的主要生理机制，有核细胞的凋亡现象和机制已经得到了深入阐述，然而，无核细胞如血小板的凋亡研究则刚刚起步，至今仅有少量文献报道，其机制尚未阐述清楚。血小板发生凋亡继而被网状内皮系统清除，是决定体内血小板生存半衰期和稳态平衡的重要因素。对血小板凋亡机制的研究十分重要，可为解决相关临床问题提供理论基础。我们最近的研究发现：激活P2Y12受体影响血小板的线粒体凋亡途径：减少血小板膜表面磷脂酰丝氨酸暴露，增加线粒体膜电位，提高14-3-3和Bad蛋白结合水平，抑制血小板的凋亡。课题组将围绕P2Y12受体激活抑制血小板凋亡的机制展开研究，检测P2Y12激活对凋亡的各项指标及（PI3K）-（Akt）-（14-3-3）-（Bad）-（Bcl-2家族）信号轴的影响，在凋亡相关性血小板疾病动物模型中评估P2Y12激活的作用，相关研究国内外未见报道，应会取得原创性结果。

血小板是脱落自巨核细胞的“无核碎片”，在人体血液循环的平均寿命为10天。在各种生理和病理性刺激物的作用下，血小板能够被激活，经历粘附、变形、聚集、颗粒释放和血栓素A2合成等过程，在凝血和止血过程中发挥关键作用。凋亡又被称为程序性细胞死亡，其特征主要包括核皱缩和细胞碎裂，过去一直认为凋亡是有核细胞的特征性现象。近来，越来越多的证据表明，尽管没有细胞核，血小板也可以发生凋亡。在刺激物的作用下，血小板的凋亡事件与活化现象有很大的区别，最主要的凋亡事件包括：线粒体膜电位去极化、caspase-3激活、Bax和Bak活化、细胞色素C释放等。血小板的凋亡参与其清除机制，决定了血小板在循环中的生命周期。血液中的化学性刺激，高剪切力以及衰老过程，都会使血小板发生凋亡。增强的血小板凋亡参与了多种疾病的病理进程，包括免疫性血小板减少症、巨血小板性血小板综合症、尿毒症、Ⅱ型糖尿病以及幽门螺旋杆菌及痢原虫的感染。研究表明，血小板的凋亡在生理或病理的生命过程中都扮演了重要角色。.近10年来，已经有70多篇关于血小板凋亡的现象和机制研究在国际刊物上发表。在与血小板活化有关的受体中，PAR1, GPIb 和GPIIbIIIa都已经被报道参与了血小板的凋亡进程。作为最为成功的抗血小板药物靶点，P2Y12在血小板活化方面已经有深入的研究，然而，P2Y12是否参与血小板的凋亡进程仍未见报道。在本项研究中，我们利用ABT-737体外处理的人血小板，37°C体外储存的人血小板，ABT-263体内处理的小鼠血小板，探索了P2Y12参与血小板凋亡进程的现象和机制。我们发现，P2Y12激活可以拮抗血小板凋亡，P2Y12激活通过Akt-Bad-14-3-3-Bcl-xL-Bak/Bax信号轴发挥抗血小板凋亡作用。其过程为，P2Y12受体激活首先通过PI3K-Akt途径磷酸化Bad，磷酸化的Bad和14-3-3蛋白结合，使Bad从Bad-Bcl-xL复合物中解离，从而释放出游离的Bcl-xL。游离的Bcl-xL通过直接与Bak结合，下调Bak的二聚化水平，抑制Bak的激活。P2Y12受体激活抑制体外储存人血小板的自发性凋亡，阻断P2Y12受体能够加剧ABT-263诱导的小鼠体内血小板凋亡。