解毒化瘀健脾法对萎缩性胃炎伴胃黏膜异型增生CpG岛DNA甲基化干预的实验研究

本课题采用MSP、Western-Blot、PT-PCR、电镜等方法进行解毒化瘀健脾法对大鼠萎缩性胃炎伴胃黏膜异型增生基因CpG岛DNA高甲基化干预的实验研究，探讨解毒化瘀健脾法与基因CpG岛甲基化致DNA错配修复基因表达之间的关系及其在胃黏膜异型增生中的作用与机制，从CpG岛甲基化致DNA错配修复基因异常表达和降解清除的角度揭示中医解毒化瘀健脾法逆转胃黏膜异型增生的作用机制；为探索、开发以基因CpG岛DNA高甲基化为靶点的治疗胃黏膜异型增生的中医药提供思路；为论证胃黏膜基因CpG岛DNA高甲基化属于胃黏膜异型增生中医的"毒损胃络"病机的假说提供理论依据；对阐明中医治法与方药有效性的分子机制具有重要意义。本项目的研究对其它食管癌、直肠癌等以基因CpG岛DNA高甲基化为特征的消化系统肿瘤疾病具有借鉴作用。

本项目旨在探讨解毒化瘀健脾法对萎缩性胃炎伴胃黏膜异型增生CpG岛DNA甲基化干预的有效性，并阐明其作用机制。实验对250只SD大鼠进行造模，9周造模成功后，123只存活大鼠被分别随机分成8组（MG组-模型组、PCG组-维甲酸组、A组-中药全方组、B组-解毒组、C组-化瘀组、D组-益气组、E组-养阴组、F组-理气组），另设12只正常大鼠为空白对照组（CG组），治疗6周后处死各组动物，采用MSP、Western-Blot、PT-PCR、免疫组化、光镜、电镜方法对萎缩性胃炎伴胃黏膜异型增生的大鼠胃进行p16、Runx3、THBS1、E-cadherin、PTEN基因检测。结果表明，与模型组比较解毒化瘀健脾法可有效实现p16、Runx3、THBS1、E-cadherin、PTEN基因去甲基化(P＜0.05)，并使这些基因表达增强(P＜0.05)，同时使胃黏膜异型增生得以逆转。此外，与模型组比较解毒化瘀健脾全方的各拆方组也可使5个目标基因去甲基化(P＜0.05)，并使这些基因表达增强(P＜0.05)，同时使胃黏膜异型增生得以逆转。其中，A组（解毒化瘀健脾方全方组）的去甲基化优势基因有可能是p16、PTEN、E-cadherin、THBS1。E组（养阴组）的去甲基化优势基因有可能是p16、E-cadherin、Runx3、THBS1。F组（理气组）的去甲基化优势基因有可能是p16、PTEN、E-cadherin、Runx3。D组（益气组）的去甲基化优势基因有可能是p16、PTEN、E-cadherin。C组（化瘀组）的去甲基化优势基因有可能是p16、THBS1。B组（解毒组）的去甲基化优势基因有可能是p16。研究结果最终显示，各中药治疗组去甲基化积极干预作用由强至弱顺序为：A组（解毒化瘀健脾方全方组）＞ F组（理气组）＞ E组（养阴组）＞ C组（化瘀组）＝ D组（益气组）＞ B组（解毒组）。实验结果揭示解毒化瘀健脾法能有效逆转胃黏膜异型增生，这可能与其对CpG岛DNA甲基化有效干预有关，另一方面也提示解毒化瘀健脾方的作用靶点可能是CpG岛DNA高甲基化，这一结果支持了中医“毒损胃络”假说，对今后深入研究中医药有效性机制具有一定意义。