Sam68调控PI3K/Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路及其在宫颈癌淋巴结转移中的作用

腹膜后淋巴结转移是早期宫颈癌最重要的预后因素，但转移机制尚未阐明，且缺乏预测淋巴结转移的分子标记物。我们最近发现，Sam68高表达与宫颈癌淋巴结转移密切相关，沉默Sam68后能抑制细胞的迁移和侵袭，进一步研究结果提示其机制可能是抑制了肿瘤转移的早期关键事件-上皮细胞间质化(EMT)，且与PI3K/Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路有关。本项目拟用动物模型在体内验证Sam68对宫颈癌转移的作用；在细胞模型中通过shRNA沉默、抑制剂干预等方法明确Sam68是否通过PI3K/Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路调控EMT；并在宫颈癌组织标本中验证Sam68、通路相关分子和EMT关键分子表达与腹膜后淋巴结转移的相关性。本项目将明确Sam68调控EMT的分子机制及临床意义，为阐明宫颈癌淋巴结转移机制、寻找预测淋巴结转移的分子标记物和治疗新靶点提供依据。

背景：前期研究发现Sam68通过PI3K/Akt/GSK-3β/Snail/E-cadherin通路调节宫颈癌细胞的迁移和侵袭，Sam68表达及其细胞浆定位与盆腔淋巴结转移相关。血管新生是恶性肿瘤生长、侵袭和转移的生物学基础，也是近年宫颈癌治疗的研究热点，故研究方向调整为Sam68在宫颈癌血管生成中作用机制及临床意义。.内容：（1）在临床标本中初步探讨Sam68与宫颈癌血管生成的关系：采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织中Sam68、VEGF-A和CD34（标记微血管密度）的表达，并分析三者之间的相关性。（2）构建稳定上调和下调Sam68表达的宫颈癌细胞模型，观察Sam68表达水平对宫颈癌细胞系血管生成能力的影响并探讨分子机制。（3）通过公共数据库寻找Sam68相关的分子，进一步探讨Sam68表达和这些分子表达的相关性，及其与宫颈癌预后的关系。.结果：（1）在宫颈癌临床标本中，Sam68表达与VEGF-A表达和MVD呈正相关(R=0.667，0.663，P<0.0001)，Sam68表达与宫颈肿瘤浸润深度、淋巴血管间隙浸润、化疗疗效及预后有关（P<0.0001）；（2）通过血管内皮细胞（HUVEC）小管形成实验、HUVEC小室穿越实验及鸡胚尿囊膜血管形成实验，发现Sam68高表达增加了HUVEC小管形成及穿越数目，以及2-3级血管形成数目；（3）进一步研究发现，Sam68通过NF-κB通路增强下游VEGF-A、VEGF-C、IL-6、IL-8及TNF-ɑ的转录，从而促进宫颈癌的血管生成；（4）URG4表达在宫颈癌细胞系和宫颈癌组织中均明显升高（高表达率为35.5%），且与Sam68表达正相关（R=0.383，P=0.001）。URG4表达与宫颈癌的临床分期（P <0.001），肿瘤大小（P =0.012），阴道受累（P = 0.004），T分期（P = 0.003），N分期（P = 0.001）相关。URG4高表达的宫颈癌患者累积总生存率低（52.5% VS 97.1%，P<0.001），尤其是接受同期放化疗的患者预后差（P<0.0001）。.意义：本研究探讨了Sam68调控宫颈癌血管生成的机制及其临床意义，为进一步阐明宫颈癌淋巴结转移机制、寻找肿瘤治疗新靶点提供依据。