低剂量脾脏照射对晚期肝癌大鼠癌、脾组织及外周血中Foxp3+Treg细胞的影响及其分子机制

低剂量辐射能够降低Foxp3+Treg细胞的活性，增强宿主抗肿瘤免疫，抑制肿瘤的形成与发展。我们前期研究发现Foxp3+Treg细胞在晚期肝癌脾脏中明显增多，与晚期肝癌脾脏的免疫抑制作用及肿瘤的生长、转移密切相关，通过脾脏切除能够去除晚期肝癌脾脏Foxp3+Treg细胞的免疫抑制作用，提高机体免疫力，抑制肿瘤生长。为此，本课题通过体内诱导大鼠肝癌模型及体外细胞实验，首次研究低剂量脾脏照射对晚期肝癌大鼠癌、脾组织及外周血中Foxp3+Treg细胞的影响并探讨其可能的分子机制，初步了解其变化与大鼠免疫功能，肿瘤生长、转移情况之间的关系。我们将验证以下设想"低剂量脾脏照射能够通过对晚期肝癌大鼠脾脏Foxp3+Treg细胞的影响，增强宿主抗肿瘤免疫功能，抑制肿瘤生长与转移"。本课题的顺利开展将会为逆转晚期肝癌的免疫功能低下、恢复脾脏的抗肿瘤功能提供一种新思路、新方法。

我们通过二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌模型，给以肝癌大鼠脾脏低剂量照射，观察低剂量照射对肝肿瘤生长及大鼠生存的影响；流失细胞仪检测血液中CD4+CD25+Treg/CD4+T比例的变化；免疫组化及RT-PCR分别检测脾脏与肝肿瘤组织中Foxp3+、IL-10、TGF-β与CTLA-4的表达。同时，通过免疫磁珠两步法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞，分别给以不同剂量射线照射，观察低剂量辐射对CD4+CD25+Treg细胞增殖，凋亡及功能的影响。研究结果初步显示（1）CD4+CD25+Treg细胞在肝癌大鼠脾脏、肝癌组织及外周血中数目增加，与肝癌大鼠免疫功能的下降，生存率降低密切相关。.（2）低剂量脾脏照射通过降低CD4+CD25+Treg细胞表面分子CTLA-4的表达，抑制CD4+CD25+Treg细胞的功能，增加肝癌大鼠的免疫力，抑制大鼠肝癌生长。.（3）降低CD4+CD25+Treg细胞表面分子CTLA-4的表达可能是低剂量辐射免疫增强作用的关键靶分子，这种免疫调节作用可能是TGF-β/IL-10非依赖的。