一种真菌抗艾滋病病毒(HIV)活性成分研究

利用真菌发酵法生产抗艾滋病毒的代谢产物，具有不破坏资源、可持续利用、能大规模工业化生产和质量可控等特点。我们前期研究发现真菌M的发酵菌丝体粗提物具有独特的抗艾滋病病毒(HIV)活性，主要为对HIV感染细胞的作用位点是在逆转录后到HIV- RNA表达之前，表明菌丝体中具有调节HIV基因表达作用的物质，它可以在急性感染和慢性感染中控制病毒复制从而延缓或阻断病毒复制。在此基础上，本项目拟对该真菌的发酵菌丝体化学成分进行系统提取、分离，并进行抗HIV活性跟踪，以发现真菌中的活性部位、活性单体化合物为目标，为利用真菌资源研发抗HIV新药提供类型丰富的化合物。

本项目建立了两个IN变构抑制剂筛选模型：（1）建立了体外筛选p75 IBD/ IN CCD蛋白-蛋白相互作用的高通量ELISA。（2）建立了体外筛选IN二聚化抑制剂的高通量ELISA。此外，还建立了2个荧光检测方法：IN核心区（IN-CCD）去整合反应检测方法和IN回文切割活性检测方法。应用新建立的筛选方法，从102株西藏药用植物螃蟹甲（Phlomis younghusbandii Mukerjee）内生真菌发酵产物中筛选出8个具有IN链转移反应抑制作用的样品，其对应的IC50值分别为：6.60 µg/ml、5.20 µg/ml、2.86 µg/ml、5.89 µg∙ml、2.79 µg/ml、4.47 µg/ml、4.56 µg/ml和3.23 µg/ml。这8个活性样品均来源于Chaetosphaeronema属真菌。. 在活性跟踪指导下，从青蒿茎部的活性内生真菌6269（Hypoxylon sp.）菌丝体中共分离鉴定了14个化合物，包括4个三萜类化合物，6个甾体，2个苯酞酸类，1个苯丙酸类和1个脂类化合物，包括integracide E（6269-1）、isointegracide E（6269-2）等，化合物1和2为新化合物，化合物3-6，8-14均为首次从本属中分离得到。化合物6269-3-5具有很好的抗HIV-1整合酶活性，IC50值分别为：6.83µM、6.51µM和10.82µM，6269-1IC50为29.06µM。从白木香的内生真菌球毛壳菌4960（Chaetomium globosum）发酵液中分离鉴定了19个化合物，包括了5个生物碱类、6个醌类、6个酯类和2个其他类化合物。化合物4960-18、10和19具有很强活性，IC50值分别为5.31μM、7.82μM和13.82μM。此外，对4960发酵液中的部分化合物进行了两两单体组合活性的测定，结果显示4960-6+11低浓度时整合酶总抑制活性好于6和11单独测定的活性，IC50值为12.75 μM，远小于计算值46.52μM。